[发明专利]一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒

说明书

目前，传统的重氮法总胆红素检测试剂盒的稳定性存在一定的缺陷，主要表现为，在不偏移检测结果5%左右的条件下，一般只能控制在5天左右，甚至只能控制在2‑3天。本发明一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒通过糅合了D‑吡喃葡萄糖苷，D‑吡喃葡萄糖，羟基乙叉二磷酸和葡聚糖4种不同的稳定剂，并形成一个囊状结构，将不稳定物质进行包被，待反应时，通过外界有效物质刺激，进行释放，从而有效增强试剂的稳定性，具有更高的市场推广应用价值。

技术领域

本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种检测血清或血浆中的总胆红素含量的检测试剂盒。

背景技术

胆红素包含游离胆红素和总胆红素两种：总胆红素又可称为结合胆红素，即血液中游离胆红素运输到肝脏后，迅速被肝细胞摄取，胆红素在肝细胞胞浆中主要与Ｙ蛋白和Ｚ蛋白结合（以Ｙ蛋白为主）。然后在内质网中结合葡萄糖醛酸生成水溶性结合胆红素；游离胆红素亦可以成为未结合胆红素，即没有与葡萄糖醛酸结合，未结合的胆红素主要是血红素在单核吞噬系统细胞微粒体血红素加氧酶的作用催化下，形成线性四吡咯的水溶性胆绿素，在细胞液中活性较强的胆绿素还原酶作用催化下，胆绿素进一步还原成胆红素。

目前对于总胆红素的检测诊断方法有很多种，主要包括重氮法、高效液相色谱法（HPLC）、氧化酶法、钒酸盐法等。重氮法是最早使用的一种总胆红素检测方法，具有成本低、应用广的特点，但传统的重氮法受多种因素的影响，其结果差异性较大；高效液相色谱法（HPLC）对仪器和设备要求较高，因此不宜作为常规方法推广应用；氧化酶法灵敏度高，抗干扰能力不强，主要是由于酶对温度要求极高，活性只能在一定温度范围内才能发挥最佳作用，而且该种方法试剂价格极高，难于推广；钒酸盐法是上世纪90年代由日本学者提出的一种新型的氧化方法，但是该方法对仪器损伤较大，钒酸盐的氧化性高于高锰酸钾，不利于保存。

鉴于以上问题，本发明提供了一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒。所述试剂盒中的试剂是由多种稳定剂和保护剂按照不同比例糅合而成，有效改善试剂在运输及储存过程中因环境因素引起的不稳定性，从而为重氮法检测胆红素提供更稳定的试剂盒。

发明内容

本发明目的是提供一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒，该发明试剂盒重点解决了重氮法在检测、储存和运输过程中存在的不稳定性和线性问题。

基本原理

总胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐结合后形成重氮化合物，该化合物在酸性条件下呈现出红色，引起545nm处的吸光光度值的变化，重氮化合物的含量可以通过吸光光度变化来计算，进而计算出血清中总胆红素的含量。

应用本发明试剂盒测定血清中总胆红素含量方法如下：检测波长为545nm，样本量：试剂R1：试剂R2=10ul：200ul：50ul。

本发明是一种稳定的重氮法总胆红素检测试剂盒，所述试剂盒是包括试剂R1和试剂R2，其成分和浓度如下：

试剂R1为：

乙二胺四乙酸二钠 0.1%-0.5%

氨基苯磺酸 50mmol/L-100mmol/L

氯化钠 5g/L-9g/L

D-吡喃葡萄糖苷 0.05%-0.1%

D-吡喃葡萄糖 0.075%-0.2%

葡聚糖 0.3%-0.5%

Triton X-405 0.125%-0.4%