[发明专利]一种康定云杉茎段组培快繁方法

说明书

本发明属于康定云杉种植技术领域，公开了一种康定云杉茎段组培快繁方法，以GD+6‑BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖2％为基本培养基，在光照时间12h·d^‑1，光强40μmol·m^‑2·s^‑1条件下培养，诱导率92.6％。继代培养以GD为基本培养基；最初继代，6‑BA浓度1.0mg·L^‑1、0.5mg·L^‑1。6‑BA浓度直接降到0.1mg·L^‑1，继代3‑4次，芽的增殖系数达到4‑5。以GD+蔗糖2％+IBA(0.1‑0.3)mg·L^‑1为生根培养基，诱导效果较好，生根率可达45％。苗成活率90％，新根发早，根系发达、粗壮，植株生长良好。

技术领域

本发明属于康定云杉种植技术领域，尤其涉及一种康定云杉茎段组培快繁方法。

背景技术

康 定云杉(Picea montigena)为中国物种红色名录中定为极危种类，国家二级重点保护植物。分类上属于松科、云杉属，树皮深灰色，呈不规则的厚片深裂。1a生枝淡褐色或褐色，被短柔毛，2a生和3a生枝灰褐色，冬芽圆锥形或状圆锥形，具树脂。叶扁四棱棱状条形，长0.6～1.3cm，宽约1.5mm，先端类，上面每边有4～7条白色气孔线，下面每边有1～4条完整或不完整的白色气孔线。球果圆柱形，长5～9cm，径3～4cm。成熟前种鳞背部绿色，上部边缘红色或紫红色，成熟时呈褐色，种鳞菱状卵形，露出部分近三角形边缘微具细缺齿。花期4～5月，球果9～10月成熟。由于该树种分布在海拔3100m～3400 m的沟谷地带，数量极为稀少，种子采集十分困难，种子发芽率低，野外调查未发现自然更新的幼树。

综上所述，现有技术存在的问题是：康定云杉数量极为稀少，种子采集十分困难，种子发芽率低。目前采用扦插和种子繁殖等方式，成活率低，材料获取困难，不能大量繁育种苗。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种康定云杉茎段组培快繁方法。

本发明是这样实现的，从外植体获取便利、消耗少、繁殖速度快等几个方面考虑，确定了茎段组培快繁的思路。一种康定云杉茎段组培快繁方法，所述康定云杉茎段组培快繁方法包括以下步骤：

步骤一，外植体采用康定云杉当年生茎段；采集康定云杉健壮植株的带节茎段，将叶片摘除，用自来水冲洗干净；

步骤二，先用70％乙醇消毒10s，用0.1％HgCl₂浸泡6min；

步骤三，用无菌手术刀将材料切成带茎节的小茎段按极性接种在芽诱导培养基上；以GD+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖2％为基本培养基；基本培养基中添加植物生长调节剂浓度设为6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1；

步骤四，继代培养以GD为基本培养基，最初继代，6-BA浓度1.0mg·L^-1、 0.5mg·L^-1。然后6-BA浓度直接降到0.1mg·L^-1，继代3-4次；

步骤五，以GD+蔗糖2％+IBA 0.1-0.3mg·L^-1为生根培养基；

步骤六，有生根组培苗的培养瓶放置于室温自然光照条件下炼苗3-5d，揭开封口膜，用镊子夹出小苗，在自来水下冲洗干净基部残留的培养基，用0.1％的多菌灵溶液消毒3-5min；用清水洗净，栽种到预先消毒处理过的基质中，基质用营养钵分装，每钵栽种1株，浇水淋透，保湿遮荫。

进一步，以GD+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖2％为基本培养基，在光照时间12h·d^-1，光强40μmol·m^-2·s^-1条件下培养。