[发明专利]一种代谢素多肽人工抗原以及抗体和应用

说明书

本发明涉及抗体领域，具体而言，涉及一种代谢素多肽人工抗原以及抗体和应用。一种代谢素多肽人工抗原，由多肽与活化的载体蛋白偶联得到；所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的代谢素多肽人工抗原，其中的多肽含有半胱氨酸，经试验得到，该多肽与活化的大分子蛋白质KLH偶联形成具有免疫原性的完全抗原，能够激发小鼠体内的免疫系统产生抗代谢素单克隆抗体。

技术领域

本发明涉及抗体领域，具体而言，涉及一种代谢素多肽人工抗原以及抗体和应用。

背景技术

代谢素是小鼠骨钙素蛋白质分子中的一段保守序列，经过序列分析此段多肽具有抗原性。骨钙素又称骨γ-羧谷氨酸包含蛋白(bone gamma-carboxyglutamic-acid-containing proteins,BGP)。该蛋白在骨矿化峰期之后才出现积聚。使用维生素K拮抗剂，可使此蛋白在骨中的含量减少，但并不影响其脯氨酸的含量，也不影响骨的机械强度。骨钙素是由成骨细胞分泌的，其含量随着年龄的变化而不同，通过血清骨钙素的含量可以了解成骨细胞的状态，对于骨质疏松的判定等具有重要的意义。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种代谢素多肽人工抗原，该多肽含有半胱氨酸，经试验得到，该多肽与大分子蛋白质KLH偶联形成具有免疫原性的完全抗原，能够激发小鼠体内的免疫系统产生抗代谢素单克隆抗体。

本发明的第二目的在于提供上述的抗原制得的抗体，该抗体能够用于检测小鼠血清中的代谢素相关的多肽分子。

本发明的第三目的在于提供含有上述的抗体的试剂盒，为代谢素相关的多肽分子的检测提供便利。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种代谢素多肽人工抗原，由多肽与活化的载体蛋白偶联得到；所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明提供的代谢素多肽人工抗原，其中的多肽含有半胱氨酸，经试验得到，该多肽与活化的大分子蛋白质KLH偶联形成具有免疫原性的完全抗原，能够激发小鼠体内的免疫系统产生抗代谢素单克隆抗体。

进一步地，所述载体蛋白为匙空血蓝蛋白。

进一步地，所述活化采用的化合物为胺类化合物。

进一步地，所述活化采用的化合物为马来酰亚胺。

本发明提供的代谢素多肽人工抗原可通过以下方法制备：

如SEQ ID NO：1所示的代谢素多肽溶解，得到代谢素多肽浓度为6-9mg/ml的多肽溶液；

活化的载体蛋白溶解，得到所述活化载体蛋白浓度为4-6mg/ml的载体蛋白溶液；

所述多肽溶液与所述载体蛋白溶液以体积比为1:2-3混合，偶联；

所述偶联的产物经分离纯化得到所述代谢素多肽人工抗原。

本发明提供的代谢素多肽人工抗原的制备方法，简便易行，并且经该方法偶联效率高，在90％以上。

进一步地，所述代谢素多肽溶解的溶剂为20±1mM磷酸钠缓冲液，其中还含有230±5mM NaCl，2±0.2mM EDTA，80±2mM蔗糖，pH 6.5-6.7。

进一步地，所述活化的载体蛋白溶解的溶剂为20±1mM磷酸钠缓冲液，其中还含有100±5mM EDTA，80±2mM蔗糖，pH 6.5-6.7。

进一步地，偶联条件为在搅拌下于室温持续2小时或者2-8℃过夜。

本发明还提供了上述的代谢素多肽人工抗原制得的抗体。