[发明专利]一种人可溶性ST2的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法

说明书

本发明公开了一种人可溶性ST2的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。该试剂盒包括：偶联有可溶性ST2捕获抗体的磁微粒、吖啶酯标记的可溶性ST2检测抗体、可溶性ST2校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。本发明试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术。本发明建立的直接化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速，检测时间短，检测结果具有更高的准确性与重复性，该试剂盒可适用于各种发光检测仪器。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体是一种人可溶性ST2的免疫磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。

背景技术

心力衰竭是一种以心室功能不全、神经内分泌激活和外周血流分布异常为特征的复杂的临床综合征。它是各种心血管疾病的终末阶段，其发病率和病死率均较高。临床上心力衰竭的症状和体征特异性较差，超声心动图、X线及有创 血流动力学等辅助检查也有局限性，且受客观条件限制。因此，仍需寻求一项客观可靠、简便、廉价、便于随访以及适合动态观察的方法作为补充手段，以提高诊断的灵敏度和特异度，并帮助判断病情的严重程度。心肌细胞牵张相关的标志 物是研究的热点之一，主要包括：N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）、肾上腺髓质素和可溶性ST2（sST2）。目前国外已有试验证实，心力衰竭患者的sST2水平显著升高。

ST2是白细胞介素-l受体家族成员，主要包括跨膜型ST2蛋白(ST2L)和血清可溶性ST2蛋白（sST2）两种异构体。IL-33主要由心脏纤维母细胞合成，是一种由生物力学诱导产生的蛋白，具有抗心肌肥厚、心肌纤维化，抗动脉粥样硬化的作用，而ST2的作用与之拮抗，从而使其抗心肌细胞肥大、心肌细胞纤维化的作用大大减弱。研究发现，心衰时sST2和ST2L表达明显增高，尤其是sST2升高更为明显。因此sST2可以作为一个独立的预测心衰的指标，是心衰不良结局的独立预测因子，且预测准确性不受肾功能、肥胖指数、年龄等因素影响。sST2蛋白是通过机械应力的诱导产生和释放的一种蛋白质，在成纤维细胞及心肌细胞受到机械性拉伸的情况下，可引起IL-33和ST2的生成释放，导致血清sST2的水平升高。心衰程度越重，心室所受的机械张力越大，sST2生成释放越多，血清sST2浓度越高。其它一些研究也表明心衰期患儿血清sST2水平与NT-Pro-BNP、心功能级别呈正相关，与反应左室收缩功能的LVEF、LVFS呈负相关。因此，血清sST2可能成为心力衰竭特别是严重心力衰竭的新的诊断指标，并可作为NT-pro BNP的重要补充手段，提高心功能状态诊断的全面性和准确性，为心力衰竭的分级、分层和预后估计提供更客观的依据。

到目前为止，用于检测人可溶性ST2的方法主要有：胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附测定法（ELISA）以及酶促化学发光法。CN 202735352 U（2013年2月）公开了一种检测人心力衰竭新型标志物ST2的快速诊断试剂盒，具体涉及一种检测人心力衰竭标志物ST2的免疫胶体金快速检测试剂盒，该试剂盒的主要缺点是操作繁琐，流程较多，更易出现误差，灵敏度低，故近年来许多本来使用胶体金免疫层析法测定的药物多已改用其他免疫分析方法。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测技术是利用抗原-抗体之间特异性的免疫反应识别生物液体中的靶分子，并利用酶-底物的显色反应定量的反应待测样本中靶分子的含量。CN106556705 A（2016年11月）申请了一种可溶性ST2的酶联免疫检测试剂盒及其制备方法，该方法虽然检测价格低廉、快速，但灵敏度也不够，只适用于微量物质的检测和鉴定，已经不能满足大型医院快速定量检测的要求。酶促化学发光法是以酶标记抗原或抗体进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定，目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(ALP)。CN106199002 A（2016年12月）公开了一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒、制备方法及应用，该试剂盒使用微孔板包被ST2抗体，碱性磷酸酶标记ST2抗体，采用双抗体夹心法来实现化学发光免疫分析ST2指标，采用碱性磷酸酶的主要缺点为：底物达到平台期的时间长，底物成本高，导致检测成本高。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测人可溶性ST2的方法具有十分重要的意义。