[发明专利]一种氯霉素的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种氯霉素化学发光检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括：吖啶酯标记物、偶联有抗原或抗体的磁微粒、氯霉素校准品溶液、清洗液、化学发光预激发液A、化学发光激发液B。本发明试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术。本发明试剂盒操作简单方便，反应条件温和，发光值稳定，受外界条件影响少；与现有技术相比，具有灵敏度高、检测快速方便、准确性高、重复性好、特异性强等优点。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体涉及一种氯霉素的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

氯霉素 ( Chloramphenicol , CAP )，是由Ehrlich于1947年分离出来的一种广谱抗生素，氯霉素可作用于细菌核糖核蛋白体的50S亚基，它可以阻挠蛋白质的合成，对革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌均有抑制作用。由于氯霉素具有价格低廉、抗菌性优良、药性稳定的特点，因而广泛用于各种动物性传染疾病的治疗，对各类家禽、家畜、水产品及蜂蜜制品各种传染性疾病的控制和治疗起重要作用。但氯霉素有严重的毒副作用，能引起再生障碍性贫血症和新生儿灰色综合症等。因此，欧盟、美国、我国以及其他国家严禁氯霉素在动物上使用。目前我国动物源食品中氯霉素残留仍很严重，因此，为保障人民的身体健康，迫切需要建立灵敏度高，特异性强的检验方法。

目前用于检测氯霉素的方法主要有高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱/质谱法、胶体金免疫分析法、酶联免疫分析法、化学发光酶联免疫法等。其中，高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱/质谱法需要大型精密仪器，繁琐耗时，检测费用高昂，检测样本有限，不适应大批量样本的检测；胶体金免疫分析法的检测是以肉眼可见的颜色进行表征，存在误差较大，操作繁琐、流程较多、灵敏度低、精度不高等缺点；酶联免疫分析法存在灵敏度低、不易实现全自动化、检测时间长等的缺点；CN104165990 A（2014.11）公开了一种氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒及使用方法，该试剂盒采用辣根过氧化物酶作为标记物，采用辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。因此建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测氯霉素的方法具有十分重要的意义。

本发明以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术进行检测。

吖啶取代物作为化学发光标记物用于免疫分析具有许多优越性，主要有：①化学反应简单、快速、无需催化剂，在有H2O2的稀碱性溶液中即能发光；②背景发光低，信噪比高，发光反应干扰因素少；③发光类型为闪光型发光，光释放快速集中、发光效率高、发光强度大；④吖啶酯分子量小，避免遮蔽抗体结合位点，可提高系统整体灵敏度；⑤易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；⑥标记物稳定，不受环境氧化剂的影响，在2-8℃下可保存数月之久。因此吖啶取代物是一类非常有效的化学发光标记物。

磁分离免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体而建立的一种新型免疫检测方法，该方法可使抗原、抗体的结合反应在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种操作简便、灵敏度更高、反应快速、稳定、准确地定量测定氯霉素的磁微粒化学发光测定试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

一种氯霉素的化学发光试剂盒及其制备方法，本发明所提供的氯霉素的化学发光试剂盒，包括以下组分：偶联有抗体或抗原的磁微粒、吖啶酯标记的抗原或抗体、氯霉素校准品溶液、清洗液、化学发光预激发液A以及化学发光激发液B。