[发明专利]一种人类T淋巴细胞白血病病毒抗体的磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种人类T淋巴细胞白血病病毒抗体磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括：偶联有人类T淋巴细胞白血病病毒抗原的磁微粒、酶标记的人类T淋巴细胞白血病病毒抗原、人类T淋巴细胞白血病病毒抗体校准品溶液、清洗液、化学发光底物液。本发明试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合酶标记技术。本发明试剂盒操作简单方便，反应条件温和，发光值稳定，受外界条件影响少；与现有技术相比，具有灵敏度高、检测快速方便、准确性高、重复性好、特异性强等优点。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体涉及一种人类T淋巴细胞白血病病毒抗体的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

人类T淋巴细胞病毒（Human T-cell lymphotropic virus，HTLV）是一种复杂的逆转录病毒，呈世界性广泛分布。与人类免疫缺陷病毒具有相似的转录调节机制，又有其独特性，如基因组稳定、潜伏期更长，可引起成人T淋巴细胞白血病、热带痉挛性下肢瘫痪/HTLV-Ⅰ相关骨髓病等相关疾病。HTLV的传播主要通过母乳喂养、性传播、输血、静脉注射毒品共用针头等途径传播。

HTLV是逆转录病毒科肿瘤病毒亚科中唯一能引起人类疾病的病毒。HTLV为球形颗粒，直径约80-130 nm。内部由RNA、核蛋白及围绕在外面的20面体蛋白衣壳组成，直径为40-60 nm，病毒最外层具有包膜结构，表面嵌有糖蛋白。病毒基因主要有gag、pol、env、pX。gag主要编码3种核心蛋白p19、p24、p15；pol主要编码病毒的逆转录酶、整合酶，核酸酶H；env编码包膜糖蛋白gp46和穿膜糖蛋白p21e；病毒的pX基因主要编码3种非结构蛋白：p40tax,p27rex 和p21X。以上基因及蛋白在临床的检测中具有重要意义。

目前用于检测人类T淋巴细胞白血病病毒的检测方法主要有聚合酶链式反应（PCR）、试纸类快速检测法、放射免疫分析法、酶联免疫分析法等。其中， PCR方法检测病毒DNA，由于污染问题不易解决、设备要求高及其它各种局限，因而未广泛采用；试纸类快速检测法由于灵敏度和特异性不够高、批量检测能力不足等因素，不适于确认性的检测应用；放射免疫测定法虽然具有高灵敏度、高特异性的优点，但其操作步骤较多，需要特殊的检测设备，试剂价格昂贵，需使用配套的仪器且存在放射性污染，使操作人员受到放射性危害，另外，放射性同位素易衰减，有效期短，不易保存；酶联免疫分析法抗原、抗体是在固相（ELISA板反应孔）表面进行结合反应，存在灵敏度低、不易实现全自动化、检测时间长等的缺点。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测人类T淋巴细胞白血病病毒抗体的方法具有十分重要的意义。

本发明以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合酶标记技术进行检测。

酶促化学发光（如HRP-鲁米诺系统、ALP-AMPPD系统、黄嘌呤氧化酶-鲁米诺系统等）用于免疫分析具有许多优越性，发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，反应体系中发光剂充分过量，发光信号强而稳定，且发光时间在数分钟至数十分钟以上；发光时间较长，其信号检测无需原位进样，一般以速率法测量，即在发光信号相对稳定的区域任意点测量单位时间的发光强度。因此，酶是一类非常有效的化学发光标记物。

磁分离免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体而建立的一种新型免疫检测方法，该方法可使抗原、抗体的结合反应在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种操作简便、灵敏度更高、反应快速、稳定、准确地定量测定人类T淋巴细胞白血病病毒抗体的磁微粒化学发光测定试剂盒及制备方法。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：