[发明专利]一种抗肿瘤试剂在人白血病细胞中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞分裂素ortho‐Topolin Riboside(oTR)作为一种去抗肿瘤药物对人白血病细胞株的抗肿瘤作用，属于生物化学与分子生物学技术领域。

背景技术

急性髓系白血病是造血系统的髓系原始细胞克隆性恶性增殖性疾病，是一个具有高度异质性的疾病群，可以由正常髓系细胞分化发育过程中不同阶段的造血祖细胞恶性变转化。根据美国FBA分型确定了AML有MO～M7共八种亚型，其中M4和M5是目前最难治且复发率最高的类型。THP‐1细胞株属于M4亚型的一种，目前对这种亚型的治疗主要是骨髓移植及化疗，而现如今临床上应用的化疗药物如阿糖胞苷(cytarabine，Ara‐C)、地西他滨(decitabine，DCA)以及氟达拉滨(fludarabine，Flu)等等都存在一系列问题，如完全缓解率低、治疗不良反应大、伴有严重的骨髓抑制。

本研究致力于在达到同等效果的前提下尽量减少药量并且抑制白血病细胞的增殖，对比了oTR与目前临床药物的抑癌效果。采用的药物主要有一下几种：DCA的主要成分5‐氮杂‐2’‐脱氧胞苷酸，为目前已知最强的DNA甲基化特异性抑制剂，主要用于治疗中高危骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes，MDS)，效果较佳，已超越传统药物。Ara‐C是治疗急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)的主要药物，因其有剂量依赖性而低浓度的药物达不到理想效果，采用大剂量Ara‐C且与常规剂量的Ara‐C相比白血病细胞内药物浓度明显增高，对肿瘤细胞杀伤作用增强，但是存在耐药和副作用如ALT升高、发热、恶心、呕吐、呃逆、腹泻和骨髓抑制。Flu是在Ara‐C的2位上加了氟增强对腺苷脱氨酶(ADA)的脱氨基作用，而在糖的部位加了磷酸增强了其水溶性。二者有协同作用，但仍存在骨髓抑制期产生的感染。

近年来越来越多的研究方向定为针对白血病患者的个体化治疗，其中细胞凋亡的研究成为个体化治疗的热点之一。细胞增殖的幅度和细胞凋亡的幅度之间是否动态平衡决定着肿瘤组织对放化疗及激素疗法的反应效果，而这些肿瘤的治疗疗法都与诱导细胞凋亡有密切的关系。

N6‐2‐苄胺羟基‐9‐呋喃核糖基嘌呤(ortho‐Topolin Riboside，oTR)是一种存在于黎明时杨树叶子内合成的天然核苷类芳香族细胞分裂素。2010年根据美国国立癌症研究中心(NIC)测试结果发现，oTR对人的9大瘤系60种肿瘤细胞系(NIC60)具有非常显著的体外增殖抑制活性，其中对白血病细胞株的药物敏感性较强(IC₅₀≦10μM)。并且通过药物体内筛选模型‐中空纤维法发现oTR在体内对一些肿瘤模型小鼠无明显的急性毒性反应。上述结果充分表明oTR作为一种核苷类细胞分裂素具有很强的抗肿瘤临床应用潜力和临床药用研发价值。目前关于oTR与现有临床药物如DCA、Ara‐C和Flu的比较未见报道。

发明内容

本发明针对上述现有技术，本发明提供了oTR在人白血病细胞株中抗肿瘤的应用。

本发明的技术方案：

一种抗肿瘤试剂在人白血病细胞中的应用，步骤如下：

(1)细胞培养：将人白血病细胞株THP‐1悬浮于含有灭活胎牛血清的无菌RPMI 1640培养液中，使用25cm²培养瓶培养，置于浓度为5％CO₂、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中培养；THP‐1细胞为悬浮细胞，48h后离心传代，在转速1000rpm，离心5min条件下分离细胞，弃上清，使用新鲜含有灭活胎牛血清的无菌RPMI 1640培养液重悬细胞，传代于同规格培养瓶中；

(2)药物配制：药物oTR、DCA和Flu均用0.1％DMSO溶解，继续用无菌RPMI1640培养基将溶解好的药物稀释至浓度为0.01μM～50μM；Ara‐C用无菌RPMI1640培养基直接溶解至浓度为0.01μM～50μM，过滤除菌，室温保存；