[发明专利]一种高效诱导胚愈伤组织的培养基的筛选配置方法

说明书

本发明公开了一种高效诱导胚愈伤组织的培养基的筛选配置方法。筛选包括以下步骤：A.将作物成熟种子去壳并烘干处理；B.配置多种待筛选的脱分化培养基，并将前述步骤去壳已烘干的作物成熟种子在组培室的超净台上接入培养基内；C.将已接入成熟种子的培养基密封，放入25‑32℃恒温培养室内进行愈伤组织诱导培养；D.10‑18天后将培养室内的培养基取出，统计培养基内的愈伤组织的诱导率和其大小。本发明针对农作物成熟种子胚的愈伤组织的诱导培养基的配置和培养条件进行了改进，在配置愈伤组织诱导培养基的时候，选择出针对不同水稻品种的最佳愈伤组织诱导培养基和培养环境。

技术领域

本发明涉及生物技术组织培养技术领域，特别涉及一种高效率从水稻成熟胚诱导愈伤组织的培养基的筛选配置方法。

背景技术

植物组织培养(plant tissue culture，PTC)的概念有广义和狭义之分，前者是指在无菌条件下利用人工培养基质对原生质体、悬浮细胞、植物器官和植物组织的培养，后者主要指对植物的组织(分生组织、表皮组织、薄壁组织等)及培养产生的愈伤组织进行培养。

20世纪30年代植物组织培养领域里出现了三个重要的发现：一是发现了生长素是一种天然的生长调节物质；二是认识了B族维生素对植物细胞生长的重要意义；三是由Gantheret和White所发展的基本方法。这三方面奠定了以后各种植物组织培养的技术基础。1937年植物组织培养有了突破性进展，美国科学家White首先建立了组培的综合培养基，其化学成分均为已知的化合物，还发现了B族维生素对离体根的生长具有重要意义，并认识到吲哚乙酸(，IAA)在植物生长中的控制作用。他和德国植物学家Gantherct等人成功地用烟草茎段形成层细胞和胡萝卜根的小块组织，人工诱导出愈伤组织，这是一个可喜的进展，但未诱导出芽和根。1939年，Gantherct连续培养胡萝卜根形成层获得成功。同年，white由烟草中间杂种的瘤组织，Nobecourt由胡萝卜也建立了类似的连续生长的组织培养物。1933年我国学者李续侗和沈同研究银杏的胚培养，将银杏胚乳的提取物加入培养基，获得成功。这是利用天然提取物获得成功的首次报道。

20世纪40、50年代以后，植物组织培养的研究日趋繁荣。1904年J.Vanoverbeek试用椰子的液体乳于培养基中，使心形期曼陀罗杂种幼胚培养成功。到50年代初，Steward等在胡萝卜组织培养中也使用了这一物质，从而使椰子汁在组织培养的各个领域中都得到了广泛应用。

进入20世纪60年代后，植物组织培养即开始走向大规模的应用阶段，同时研究工作也更加深入和扎实。通过与常规育种、良种繁育和遗传工程技术相结合，在植物改良中发挥了重要的作用，并且在若干方面已经取得了可观的经济效益。1960年G.Morel采用兰属的茎尖培养，实现了去病毒和快速繁殖两个目的。这是经过茎尖一原球茎一小植株的方式而再生的，成为植株再生的第四种方式。1960年，E.c.cocking采用纤维素酶和果胶酶等酶制剂分离番茄幼根，获大量健康的原生质体。1971年T.Takebe等首次报道由烟草原生质体通过细胞壁再生、细胞分裂等过程再生出了完整的植株，确证了原生质的全能性。1972年P.5.Carlson等完成了粉蓝烟草和长花烟草的原生质体融合，实现了体细胞杂交。1962年Murashige和Skoog发表了促进烟草组织快速生长的培养基成分，这就是目前非常流行的、卓有成效的MS培养基。