[发明专利]一种检测抗体类药物与人体和动物正常组织交叉反应的方法

说明书

本发明公开了一种检测抗体类药物与人体和动物正常组织交叉反应的方法，包括以下步骤：(1)人体和动物组织标本的固定和包埋；(2)人体和动物组织芯片的制备；(3)人体和动物组织标本的切片与排布；(4)抗体类药物的标记；(5)采用免疫组织化学方法检测抗体类药物与人体和动物正常组织交叉反应。该方法首先利用组织芯片进行初筛，然后在人体和不同动物种属组织中进行高通量的免疫组化试验，并提高对结果判读的准确性，有效地提高了组织交叉反应试验的效率，加快实验流程，适合产业化。

技术领域

本发明涉及一种检测抗体类药物与人体和动物正常组织交叉反应的方法，特别是涉及一种高通量地、更准确地进行结果判读的用于冰冻组织切片和石蜡组织切片的方法，所涉及的动物组织来源于大鼠、小鼠、犬、狨猴、食蟹猴或恒河猴。

背景技术

作为一种特殊的生物技术药物，单克隆抗体(以下简称单抗)具有其特定的免疫化学性质，即对抗原结合的特异性，表现为单抗可作用于表达其抗原表位的靶组织。但如果正常组织中存在相同或相似的抗原表位，单抗则可能会与靶组织以外的其他组织发生结合，从而可能导致不良反应的发生。因此，单抗的免疫化学性质评价还应包括对这种可能的“脱靶”结合的考察。组织交叉反应检测是区分“在靶”结合的靶器官和“脱靶”结合的非靶器官的重要手段，同时通过对单抗在人体和动物组织中组织交叉反应类型的比较，可以为用于毒性评价的动物种属选择提供参考。此外，对于含有人免疫球蛋白IgG的Fc片段的融合蛋白，由于其具有与分布于正常组织上的Fc受体结合的可能性，因此在某些情况下，进行这一类药物的组织交叉反应检测也是有意义的。

尽管组织交叉反应试验是基于常规的免疫组织化学技术而实施的，但是系统的将30余种组织(每种组织来自3个个体)在同一个系统中进行高通量地检测、比对和评价，需要进行精心的设计和对现有方法的改进，以便高通量地进行试验的实施和对结果进行准确地判读。基于此，需要开发一种高通量、更准确地检测抗体类药物与人体和动物正常组织交叉反应的方法。

发明内容

本发明就是针对上述存在的缺陷而提供一种检测抗体类药物与人体和动物正常组织交叉反应的方法。该方法首先利用组织芯片进行初筛，然后在人体和不同动物种属组织中进行高通量的免疫组化试验，并提高对结果判读的准确性，有效地提高了组织交叉反应试验的效率，加快实验流程，适合产业化。

本发明的一种检测抗体类药物与人体和动物正常组织交叉反应的方法技术方案为，包括以下步骤：

(1)人体和动物组织标本的固定和包埋；

(2)人体和动物组织芯片的制备；

(3)人体和动物组织标本的切片与排布；

(4)抗体类药物的标记；

(5)采用免疫组织化学方法检测抗体类药物与人体和动物正常组织交叉反应。

所述步骤(1)中，采集的步骤为：动物麻醉后摘取新鲜组织，剔除结缔组织和多余脂肪，用生理盐水冲掉残留的血液并用吸水纸吸净水分；人体组织采用活检组织或手术标本；

动物组织来源于以下种属：大鼠、小鼠、犬、狨猴、食蟹猴和恒河猴，每个种属单独取材并建立组织库。

所述新鲜组织包括以下33种：