[发明专利]一种野生蕉开放式组织培养方法

说明书

技术领域

本发明提供野生蕉开放式组织培养方法，属于植物组织培养离体增殖领域。

背景技术

野生蕉相对于栽培蕉具有大量的抗逆基因，研究发现三明野生蕉具有抗寒、抗病等重要的抗逆基因，是进行基础研究的宝贵种质资源，是香蕉生物工程研究中重要的研究材料。传统意义上的香蕉离体繁殖技术，一般是在无菌条件下操作，对无菌设备要求很高。例如需要配备高压锅、超净工作台、无菌操作室等无菌设备，成本较高。本发明将开放式组织培养方式应用于野生蕉离体培养，降低了对无菌环境的要求，也相应的大大降低了因基础设施、实验设备、水电消耗、无菌环境维护、人力消耗等造成的生产成本。且培养基和接种器具无需高压，不但简化了组培环节，节省了人力、物力，也避免了因培养基高压而造成的激素和营养元素的损耗与流失。选用次氯酸钠为抑菌剂，优化其使用浓度，使用筛选出的培养基：MS+2.0 mg/L NAA+ 4.0 mg/L6-BA+NaClO 0.01%，可使三明野生蕉在开放式离体培养过程中效果最好。每升培养基添加次氯酸钠的价格成本为0.06元，成本较低。故这种开放式组织培养的方式相对于传统的组织培养方式操作简便，成本大大降低。目前这种开放式组织培养方式在野生蕉的离体培养上还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种野生蕉开放式组织培养方法，能高效、简便、低成本的进行三明野生蕉离体培养。

为实现上述目的，采用以下技术方案：

一种野生蕉开放式组织培养方法，将野生蕉的组培苗在开放、自然条件下相对干净的桌面上切去叶片、假茎，留有生长点的吸芽，接种到添加次氯酸钠的培养基上；每瓶培养基接种4个吸芽；然后放进培养室进行培养，培养期间培养温度为25℃，光照强度为2000 lx，光照时间为12 h/d。30天后进行统计其污染率及增殖系数。

所述培养基为MS+2.0 mg/L NAA+ 4.0 mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，培养基中添加终浓度为0.01wt.%NaClO。

本发明的优点在于：

本发明运用三明野生蕉作为试验材料，次氯酸钠作为抑菌剂，进行野生蕉开放式组织培养体系的建立。开放式组织培养方式虽然在栽培香蕉中有应用，但在野生蕉组织培养过程中还未见报道。开放式组织培养的应用，可使野生蕉离体培养体系过程中的成本大大降低，操作简化。因此，开放式组织培养体系在野生蕉上的应用是非常有前景的，并有望做为野生蕉离体培养的一种重要的方式。筛选出用于野生蕉开放式组织培养的有效培养基：MS+2.0 mg/L NAA+ 4.0 mg/L6-BA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+ NaClO 0.01%。在考虑成本的前体下，这种培养基在三明野生蕉开放式组织培养应用过程中，三明野生蕉离体培养效果最好。这种开放式组织培养的方式在野生蕉组织培养过程中操作简便，成本大大降低，可作为野生蕉离体培养过程中的一种简便有效的方式。

附图说明

图1 是本专利中三明野生蕉在添加不同浓度的抑菌剂的培养基中发生褐化及污染的生长状况示意图。其中，图a和b是接种在L5、L6培养基中的三明野生蕉发生褐化的示意图；图c、d、e、f是接种在L1、L3、L4培养基中的三明野生蕉在不同生长阶段发生污染的示意图。其中，图c为三明野生蕉接种在L1培养基1-2天后发生污染的示意图，图d、e是三明野生蕉接种L4培养基后8天左右发生污染的示意图，图f是三明野生蕉接种L3培养基后15天左右发生污染的示意图。

图2 是本专利中接种到添加抑菌剂培养基中的三明野生蕉生长状态良好及发生增殖现象的示意图。其中，图a为三明野生蕉接种到添加抑菌剂的培养基后前期，三明野生蕉长势良好；图b、c为三明野生蕉接种到L3培养基后发生少量增殖现象；图d为接种到L4培养基中后三明野生蕉长势良好但未发生增殖现象；图f、i为接种到L2培养基后三明野生蕉长势良好且发生大量增殖现象的示意图；图e、g、h为接种到对照培养基后三明野生蕉长势良好并发生增殖现象的示意图。

具体实施方式

实施例1

1. 接种前准备工作。

开放式组织培养试验：在相对干净的室内，用75%酒精将桌面擦拭干净。将接种用到的接种刀、镊子、滤纸、接种盘、废液缸等接种工具用75%酒精擦拭后，无需高压灭菌，放进操作台上。

对照试验：在接种室内，将高压好的接种工具等进行高压灭菌后，放入超净工作台，进行20min 的紫外灭菌后，用于对照试验接种使用。

2. 培养基的制备