[发明专利]一种提高关节软骨体外保存效果的力学刺激方法

权利要求书

1.一种提高关节软骨体外保存效果的力学刺激方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、体外获取动物或人的关节软骨组织；

步骤二、将体外获取的关节软骨组织置于内含组织培养液的滚压力学刺激装置内，对软骨组织块施加滚压力学刺激；所述的滚压力学刺激方法为：按照刺激频率为0.1-3.0HZ、刺激时间为1.0-120min、压强为0.1-3Mpa的组合参数，给予软骨组织每3天刺激1次的周期性滚压力学刺激，然后更换组织培养液并体外保存；所述力学刺激方法所需的环境是：无菌条件下，温度控制在0℃-37℃，1个标准大气压，湿度为40％-60％；

步骤三、力学刺激后在第3天，7天，14天，21天检测软骨细胞存活率、蛋白多糖、II型胶原和软骨组织的杨氏模量，评价力学刺激后的作用及效果；

步骤一软骨组织取材方法为无菌取材来自人和动物膝关节软骨，该软骨采用非活体人或动物膝关节软骨；将骨软骨块骨质面修整齐平；所述软骨组织取材选部位为股骨内外髁关节面的负重区；

步骤一软骨组织取材的具体操作方法为：遵照无菌原则将人或动物的膝关节样本固定于手术台上，采用碘伏对样本进行消毒，铺无菌巾；取材在手术室中操作，取材器械与相关用品均高温高压灭菌处理；确认关节囊完整性，行膝关节正中切口，打开关节囊，离断髌韧带，检查前后交叉韧带完整性之后将其关节离断，完全暴露膝关节面，检查关节面有无损伤或炎症表现，选取股骨关节面内外髁负重区，使用专用骨软骨采集器械取材圆柱形骨软骨块或者取下带有股骨髁关节软骨面的半髁，而后将骨软骨块底面的骨质修整平齐，放入无菌器皿中，PBS冲洗；

所述步骤一中取材圆柱形骨软骨块的规格为长度15mm，直径为6.0mm、8.0mm或10.0mm；

所述步骤二中所述的滚压力学刺激装置包含箱体、力学加载装置和软骨组织块存放装置，所述力学加载装置通过往复运动与软骨组织块表面进行摩擦，施加滚动力和滑动力的力学载荷；

所述步骤二中组织培养液选自DMEM培养液或TSMU培养液；

所述TSMU培养液成分为：每1000ml所述培养液包括，葡萄糖80～125mmol、氨基酸0.1～2.0mmol、抗氧化剂0.2～2.0mmol、碱性成纤维细胞生长因子5～60nmol、无机盐1～120mmol、维生素1～9mmol、丙酮酸钠1～2mmol、青霉素50～70U、余为去离子水。

2.根据权利要求1所述的一种提高关节软骨体外保存效果的力学刺激方法，其特征在于，所述TSMU培养液中无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙中的一种或几种的组合。

3.根据权利要求1所述的一种提高关节软骨体外保存效果的力学刺激方法，其特征在于，所述步骤三中，通过EB/FDA双荧光染色法计算软骨细胞存活率；采用番红O-固绿染色法检测蛋白多糖含量；采用免疫组化法检测II型胶原含量；采用英斯特朗力学测试仪检测杨氏模量。

4.一种组织库软骨保存方法，其特征在于，采用权利要求1～3任一项所述的一种提高关节软骨体外保存效果的力学刺激方法。