[发明专利]一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用

说明书

本发明属于亲和富集整体材料领域，公开了一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用。将单体GMA与交联剂、致孔剂和引发剂混合反应得到基质整体材料；然后将金属螯合剂溶液灌注到基质材料中，加热反应，然后灌注金属无机盐溶液反应，将金属离子螯合固定到基质材料上，再灌注含组氨酸标签的小肽配体溶液反应，得到基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料。本发明的整体材料以小肽作为亲和配基，相比较于常用的蛋白质A/G、抗原或靶标蛋白等生物大分子配基，其表现出价格低廉、化学性质稳定、不含生物杂质、无免疫原性、洗脱条件非常温和不会对抗体蛋白的构象产生破坏、使用寿命长等优点。

技术领域

本发明属于亲和富集整体材料领域，具体涉及一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料及制备与应用。

背景技术

单抗药物由于具有靶向性强、特异性高、毒副作用低等众多优点而成为目前制药界的热点领域。2014年全球销售前十的药物中抗体类药物占七席，并包揽了前三甲[NatureReviews Drug Discovery,2015,14(2):83-83；Nature Reviews Drug discovery,2014,13(8):577-587.]。据全球顶尖市场调研公司PMR的最新预测，至2020年全球抗体类药物市场规模将超过1400亿美元。值得注意的是，在单抗药物的生产过程中，下游单抗纯化的花费约占总体成本50-80％[Journal of Chromatography A,2016,1466:105-112.]，严重制约了单抗药物的推广和普及。一直以来，基于蛋白质A/G的亲和富集材料凭借其高亲和能力和强特异性在单抗纯化中占主导地位[Journal of Chromatography B,2014,962:89-93.]。但是，蛋白质A/G存在易降解、易脱落、对pH值敏感、甚至因结合作用过强而破坏抗体蛋白空间结构、使用寿命短、用于体内样品分析时难以消除内源性IgG的干扰等缺点。而且常用的商业化蛋白配基固定载体，如琼脂糖等，通常存在一定的非特异性吸附，最终影响到单抗的富集纯化效果，为后续的质量监控和临床应用分析等带来诸多困难。

为了弥补生物大分子配基存在的不足，近年来涌现了一系列新型抗体亲和配基，常见的有小分子配基(螯合金属离子类[Methods,2012,56(2):116-129.]、氨基酸类[Journal of Chromatography A,2011,1218(13):1756-1766.]和硼酸类配基[ChemicalScience,2012,3(5):1467-1471.]等)和合成仿生配基(染料类、三嗪类和Ugi类配基等)[Methods,2012,56(2):116-129.]。小分子配基稳定性好、价格便宜，但其特异选择性和亲和性不如生物大分子配基[Methods,2012,56(2):116-129.]。合成仿生配基通常以蛋白质A/L/G为模板设计合成，稳定性、选择性和亲和性较好，适用于细胞培养上清液中mAb的富集纯化，但对于含有大量高同源性IgG等杂蛋白的体内样本，其特异选择性仍显不足[Bioanalysis,2016,8(8):847-856.]，并且染料等配基存在毒性和生物兼容性差的缺点[Methods,2012,56(2):116-129.]。

鉴于此，开发成本低、稳定性好、特异性高、非特异性吸附低、生物兼容性好的新型仿生小分子亲和富集材料，对单抗药物的生产研发、质量控制与临床应用评价均具有十分重要的理论和应用价值。

发明内容

针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法。

本发明的另一目的在于提供一种通过上述方法制备得到的基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料。

本发明的再一目的在于提供上述基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料在细胞培养液或血清样品中目标单抗药物富集中的应用。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种基于仿生小肽配基的亲和富集整体材料的制备方法，包括如下步骤：