[发明专利]一株能稳定表达抗干扰素γ的基因工程单链抗体株及应用

说明书

本发明属于抗体工程领域，具体涉及一株能稳定表达抗干扰素γ（IFN‑γ）的基因工程单链抗体株及其应用。本发明通过基因工程手段在体外克隆干扰素γ的基因，构建原核表达载体，IPTG诱导表达纯化获得可溶的干扰素抗原蛋白。利用噬菌体展示技术，淘选出能稳定分泌表达抗（IFN‑γ）的基因工程单链抗体株，并通过构建原核表达载体表达纯化出具有功能的单链抗体，利用竞争ELISA方法，实现对人血液中IFN‑γ的定性与定量检测，为商品化的开发生产高质量的酶联免疫检测试剂盒和金标抗体检测卡奠定了基础。

技术领域

本发明属于抗体工程领域，具体涉及一株能稳定表达抗干扰素γ的基因工程单链抗体株及其应用。

背景技术

干扰素γ（Interferon-γ, IFN-γ）是一种主要由活化T细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）产生分泌的细胞因子，属于是II型干扰素的唯一成员。干扰素γ单体是由六个α螺旋组成一个核心和在C端区延伸展开的片断序列。具有生物活性的干扰素γ二聚体是由两个反平行相互锁定的单体形成，广泛存在于人类和哺乳动物的血液中。干扰素γ具有抗病毒、免疫调节及抗肿瘤特性。还有研究报道，干扰素可以用来治疗传染病，但也能促成自身免疫。

目前，针对人血液中的干扰素γ检测技术普遍采用的是电化学类方法，主要包括环化金属铱传感器检测（Cyclometalated iridium（III）complex conductor）、微型可视化电传感器（Micropatterned apatamer-modified electrodes）、基于DNA适配体电化学检测（DNA aptamer-based electrochemical biosensor）等。上述的基于电化学方法的干扰素γ检测虽然具有较高的检测灵敏度，但是检测耗时且对样品的纯度要求高，操作复杂、环境要求高且稳定性差、需要专业的检测机构和技术人员，因此不适合推广和用于实际临床血液样品中干扰素γ的快速准确的检测。免疫分析法（Immuno-analysis）方法是近十多年来发展起来的新方法，是将抗原抗体反应与灵敏的检测系统结合而成的一种分析方法，具有特异性好、灵敏度高、操作技术简单、成本低、对样品的纯度要求不高等优点，特别适合于大批量样本的检测，近年来被广泛普及应用于各种毒素的检测。

干扰素γ是抗原刺激下淋巴细胞所产生的。干扰素γ具有很强的抗病毒活性，而且干扰素能够抑制多种病毒的增殖，在医学上是一类广谱的抗病毒药物。同时，干扰素γ是评估机体细胞免疫应答的重要检测指标，在实际的临床医学中具有极其重要检测和诊断意义。为此，对于医院、研究所和卫生防疫部门来说，更需要一个简便、快速、灵敏的方法对干扰素γ进行检测。但目前为止，基于基因工程抗体的对干扰素γ进行免疫学检测方法的研究还没见报道。因此，制备针对干扰素γ的高亲和力特异性强的基因工程抗体并建立基于基因工程抗体的免疫学检测方法，为最终开发基于基因工程抗体的商品化检测试剂盒与胶体金检测卡奠定了基础。

发明内容

本发明的目的是提供一株能稳定表达高亲和力的抗干扰素γ（IFN-γ）基因工程单链抗体株。

本发明首先提供一株抗IFN-γ毒素的基因工程单链抗体株pET28a-mbp-linker-scFv-A8/ BL21。

所述抗体株为大肠埃希氏菌（Escherichia coli）pET28a-mbp-linker-scFv-A8/BL21，已于2017年11月6日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No .14860，地址为北京市朝阳区北层西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

其次提供一种有所述的单链抗体株pET28a-mbp-linker-scFv- A8/BL21表达的单链抗体。

所述的基因工程单链抗体的制备方法，是将噬菌体展示淘选得到的单链抗体基因扩增，克隆到原核表达载体中，并转化大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达纯化，获得的具有IFN-γ抗原结合活性的单链抗体。