[发明专利]一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法

说明书

本发明公开了一种重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法。它以重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ为对照品，以乙腈（A）‑水(B)/梯度洗脱0～15min30%～40%A；15～40min40%A；40～70min40%～60%A流动相的高效液相色谱法。与现有技术相比，本发明为同时测定四种有效成分含量，质量概述全面，专属性强，稳定性高，测量结果准确，达到了有效控制该制剂质量的目的，确保了该制剂及其相关产品质量的稳定及临床用药的安全。

技术领域

本发明涉及了一种重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法，属于中药质量检测技术领域。

背景技术

重楼解毒酊制剂处方由重楼、生草乌、艾叶、石菖蒲、大蒜、艾片六味中药材组成，具有清热解毒，散淤止痛。用于肝经火毒所致的带状疱疹，皮肤瘙痒，虫咬皮炎，流行性腮腺炎。经临床应用并证明，本品治疗效果明显，具有抑菌、抗病毒感染，清热解毒，消肿散瘀，疏经止痛之功效。目前已有的剂型为酊剂。

本制剂由重楼、生草乌、艾叶、石菖蒲、大蒜、艾片六味药材组成，在现行质量标准中鉴别项和含量测定项仅控制重楼、石菖蒲药材的鉴别及艾片的含量测定，质量控制体系单一，重楼为方中君药，处方中含量高。现代药理学表明，重楼中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ具有抗肿瘤、抗感染、止血、抗血管生成、抗骨质疏松、抗氧化等药理作用。因此在现有质量标准的基础上，增加多指标有效成分的含量测定，有利于该制剂的质量及临床应用的稳定性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法，以期能够对制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ的含量进行快速、准确、高重现率、高回收率的测定。

本发明完成前未发现对该制剂进行重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种成分同时测定的报道。本发明所述的重楼解毒酊制剂：重楼、生草乌、艾叶、石菖蒲、大蒜、艾片六味药材，大蒜去皮，捣碎成泥，重楼、生草乌、石菖蒲、艾叶粉碎成最粗粉（过10目筛），加二倍量稀乙醇，浸渍10天，去上清液，药渣滤过，滤液和上清液合并，加入艾片，搅拌使溶解，加水和乙醇调整至1000ml,并使含醇量达45%～55%，搅匀，静置3天，滤过，即得。已获得专利2013101172316《重楼解毒酊及其制备方法》。

本发明采用如下的技术方案：

一种重楼解毒酊制剂中四种有效成分的含量测定方法，以重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ为对照，以乙腈（A）-水(B)/梯度洗脱0～30min30%～60%A；30～40min40%A；40～80min40%～80%A为流动相的高效液相色谱法。对制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ的含量测定按照如下步骤进行：

（1）色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷合硅胶为填充剂；以乙腈（A）-水(B)/梯度洗脱0～30min30%～60%A；30～40min40%A；40～80min40%～80%A为流动相；柱温20～30℃；检测波长为200～275nm；流速为0.8～1.2mL/min；理论塔板数以重楼皂苷I计不得少于4000。

(2)对照品溶液的制备：取重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ对照品适量，加甲醇制成浓度分别含重楼皂苷I0.64mg/mL、重楼皂苷Ⅱ0.46mg/mL、重楼皂苷Ⅲ0.26mg/mL、重楼皂苷Ⅳ0.23mg/mL的溶液，按1:1:1:1混合，摇匀，临用前用0.22μm微孔滤膜过滤，即得。

(3)供试品溶液的制备：取装量差异下的重楼解毒酊制剂5ml，蒸至无醇味，精密加入甲醇5mL，称定重量，超声或加热回流30～60min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，回收溶剂至干，用甲醇溶解残渣，定容于5ml量瓶中，滤过，取续滤液，即得。