[发明专利]一种薄层色谱联合高效液相色谱检测动物饲料中氯霉素含量的方法

权利要求书

1.一种薄层色谱联合高效液相色谱检测动物饲料中氯霉素含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）在研磨后的动物饲料中加入乙酸乙酯，涡旋后离心；

（2）移取上清液，空气流吹干，先加入乙腈、涡旋，再加入乙腈饱和的正己烷、涡旋，离心，弃去上层正己烷；其中，上清液、乙腈、乙腈饱和的正己烷的体积比为1-5:0.05-0.1:1-5；

（3）将下层的乙腈层和氯霉素标准品分别点样于同一块GF-254硅胶薄层板的不同位置，于体积比二氯甲烷:丙酮:氨水等于1-5:5-9:0.25的混合液中展开至顶端；所述的氨水的浓度为25%-28%；

（4）将GF-254硅胶薄层板取出，待溶剂挥干后于254-360nm下检视，根据氯霉素标准品的展开距离标记饲料提取液中氯霉素的大致位置，刮取对应位置的硅胶；

（5）于刮取的硅胶中加入乙腈-水混合溶液，涡旋，离心，取上清，通过滤膜过滤；其中，乙腈-水混合溶液中乙腈与水的体积比为33:67；

（6）将过滤后的样品通过高效液相色谱检测氯霉素含量；其中，高效液相色谱流动相为乙腈与水按体积比为33:67组成的混合液；高效液相色谱的条件为：色谱分离在WatersSymmetry C18色谱柱内完成，柱温为32-40℃，流动相流速为0.5-1mL/min，检测波长为250-280nm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中：动物饲料与乙酸乙酯的质量体积比为2-5g:20-100mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中：研磨后的动物饲料的粒径为1-10mm；涡旋的时间为1-5min，离心的条件为3000-8000g离心2-5min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中：空气流吹干的温度为45-60℃；两次涡旋的时间均为1-2min；离心的条件为3000-8000g离心2-5min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（5）中：涡旋的时间为1-3min；离心的条件为3000-8000g离心5-10min，滤膜为0.22μm有机滤膜。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）动物饲料经过研磨，过1-10mm筛；称取研磨、过筛的动物饲料样品2-5g，加入乙酸乙酯20-100mL，涡旋1-5min，3000-8000g离心2-5min；

（2）移取上清液1-5mL，45-60℃空气流吹干；加入乙腈50-100μL，涡旋1-2min；加入乙腈饱和的正己烷1-5mL，涡旋1-2min，3000-8000g离心2-5min，弃去上层正己烷；

（3）将下层乙腈层和氯霉素标准样品点样于GF-254硅胶薄层板的不同位置，于体积比二氯甲烷:丙酮:氨水等于1-5:5-9:0.25的混合液中展开至顶端；所述的氨水的浓度为25%-28%；

（4）将GF-254硅胶薄层板取出，待溶剂挥干后于254-360nm下检视，根据氯霉素标准品的展开距离标记饲料提取液中氯霉素的大致位置，刮取对应位置的硅胶；

（5）于刮取的硅胶中加入体积比乙腈:水等于33:67的混合液1-2mL，涡旋1-3min，3000-8000g离心5-10min，取上清，用0.22μm有机滤膜过滤；

（6）过滤后的样品通过高效液相色谱检测氯霉素含量。

7.一种薄层色谱分离动物饲料中氯霉素的方法，其特征在于：包括权利要求1-6任一项所述方法的步骤（1）-（4）。