[发明专利]检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法

权利要求书

1.一种检测AFB1的免标记便携式适配体传感器的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：

步骤1、磁性纳米粒子Fe₃O₄的制备；

步骤2、金包四氧化三铁核-壳结构磁性纳米粒子(Fe₃O₄@Au NPs)的制备；

步骤3、核酸适配体修饰的Fe₃O₄@Au纳米生物探针(Fe₃O₄@Au-apt)的制备；

步骤4、丝网印刷电极(SPCE)的预处理；

步骤5、免标记便携式适配体传感器的构建；

步骤6、电化学交流阻抗法检测AFB1；

步骤2中，Fe₃O₄@Au的制备方法为：取步骤1中制备的Fe₃O₄磁性纳米粒子分散液，加入丙氨基三乙氧基硅烷(APTS)室温下机械搅拌反应7h，磁分离并用乙醇洗涤数次，将产物重新分散于40mL水中；将1wt％的HAuCl₄溶液逐滴加入到上述分散液中，于100℃温度下回流反应30min，后逐滴加入1wt％的柠檬酸钠溶液，于100℃温度下回流反应3h后，将所得产物磁分离并水洗数次，重新分散于40mL水中备用；

步骤2中，所述Fe₃O₄纳米粒子分散液和APTS的体积比为100:1；所用HAuCl₄溶液和柠檬酸钠溶液的体积比为1:2；

步骤3中，核酸适配体修饰的Fe₃O₄@Au纳米生物探针的制备方法为：首先取经过三(2-乙羧基)磷盐酸盐(TCEP)活化的新鲜10μM的AFB1核酸适配体溶液加入到1mg mL^–1的Fe₃O₄@AuNPs的50mM，pH 7.4的Tris-HCl缓冲溶液分散物中，37℃下振荡反应6h；采用外加磁场分离的方法，将磁控产物用Tris-HCl缓冲溶液反复洗涤数次以去除未反应的aptamer；再将其重新分散在2μM 6-巯基己醇(MCH)的溶液，37℃条件下反应1h，得到MCH封闭的纳米生物探针(Fe₃O₄@Au-apt)，用10mM Tris-HCl缓冲溶液洗涤数次去除未反应的MCH，将其重新分散在5mL的50mM，pH 7.4的Tris-HCl缓冲溶液中，4℃保存备用；

步骤3中，所用AFB1的核酸适配体序列为：5′-GTT GGG CAC GTG TTG TCT CTC TGT GTCTCG TGC CCT TCG CTA GGC CCA CA-SH-3′；

步骤3中，所述核酸适配体溶液、Fe₃O₄@Au分散液和MCH溶液的体积比为1：50：50；

步骤5中，免标记便携式适配体传感器的构建步骤为：将步骤4中预处理过的SPCE的工作电极底部固定磁铁，并在其工作电极表面涂布20μL步骤3中制备的Fe₃O₄@Au-apt纳米生物探针的分散液，移除上层溶液，制得用于AFB1检测的适配体传感器(SPCE-Fe₃O₄@Au-apt)；

步骤6中，所述适配体传感器(SPCE-Fe₃O₄@Au-apt)检测AFB1的步骤如下：分别取10μL不同浓度的AFB1标准溶液滴涂在所制备的电化学适配体传感器的界面上，在37℃条件下孵育60min，之后将传感器界面用10mM pH＝7.4的Tris-HCl缓冲液淋洗；将SPCE的三电极体系置于50μL阻抗液，扫描电化学阻抗图谱和循环伏安曲线，根据阻抗值与对应的AFB1标准样浓度建立标准曲线。