[发明专利]一种水鬼蕉叶斑病致病毒素的提取及活性测定方法

说明书

本发明公开了一种水鬼蕉叶斑病致病毒素的提取及活性测定方法，其包括如下步骤：1)取患有叶斑病的水鬼蕉上的患病部位提取出灰霉菌粗毒素和轮枝孢菌粗毒素并鉴定；2)对步骤1)提取出的灰霉菌粗毒素和轮枝孢菌粗毒素进行蛋白质含量测定；3)将步骤1)提取出的灰霉菌粗毒素和轮枝孢菌粗毒素分别配制成不同浓度的溶液，通过涂抹法涂抹健康水鬼蕉幼苗叶片，进行致萎活性测定。本发明针对水鬼蕉叶斑病毒素的提取及活性测定方法，有效得出了灰霉菌粗毒素和轮枝孢菌粗毒素的蛋白质含量及对水鬼蕉叶斑病的影响，为后期水鬼蕉叶斑病的防治提供技术支持。

技术领域

本发明涉及植物培植领域，特别涉及一种致病病毒的提取及活性测定方法。

背景技术

水鬼蕉又名美洲蜘蛛兰，石蒜科水鬼蕉属植物，是一种多年生的球根花卉，主要产地集中在南美洲与东南亚热带丛林地区，原产地为美洲热带地区。在我国广东、广西、福建、云南、重庆等南方省市大面积分布。其叶色苍绿，叶形美观；花色洁白，花形娇美；具有较高的观赏价值。水鬼蕉的花语为“天生丽质”，具有美好的寓意，外观清雅脱俗，因此在观赏花卉市场上占有一定的份额，具有一定的经济价值。同时水鬼蕉的鳞茎中含有石蒜碱等多种生物碱，对于舒筋活血有很好的药用作用，有较高的药用价值，常用于跌打、肿痛等症状。在绿化作用上，常用于道路绿化、公园绿化、桥荫绿化、庭院绿化等，是我国主要的绿化作物；同时也是我国的二级保护植物。

蜘蛛兰是一种很好的芳香原料，由于其拥有清淡脱俗的清香，与其他芳香花卉，如：玫瑰、鸡蛋花等可以提炼精油和浸提芳香浸膏等香料。其芳香化妆用品及养生用品制成品受到广大消费者的热烈欢迎与支持，销量可观，远销海外，形成一支新兴的产业链，创造了较大的经济价值。同时，水鬼蕉作为鲜切花，因其外形脱俗，花色淡雅，在消费市场上同样受到消费者的热烈追捧，与康乃馨、百合花等传统花卉，共同占有大量的市场份额。由此可知，水鬼蕉不仅拥有观赏作用、药用作用、绿化作用，还拥有经济作用。因此，水鬼蕉是重要的观赏作物、药用作物、绿化作物、经济作物，对其常发的叶斑病进行研究，降低发病率是很有必要的。

水鬼蕉常有叶斑病，其发病一般由以下几点引起。(1)种子带叶斑病菌引致的细菌性叶斑病；(2)田间病菌初次侵染；(3)越冬叶斑病菌残留在病残体上引起的细菌性叶斑病的二次侵染；其中，最主要的病原来源是第三点，可通过清洁田园来避免病原物的侵害，降低发病率。

叶斑病的发病一般与施肥、播种期、气象等因素有关，其中：(1)施肥：氮肥一般对叶斑病有促进发病的作用，而钾肥则有抑制发病的作用；在一定范围内，随氮肥的施用量增多，叶斑病的病情发展越重；随钾肥的施用量增多，叶斑病的病情越不明显。由此可见，钾肥可使植物获得更强的抗病性，抵挡病害入侵，而氮肥则相反；(2)播种期：病害的发生与播种期有关，随播种期的提早与推迟，病害的发生与发展也相对应地提早与推迟；但播种期越晚，病害发生情况越严重，因此要使病害减轻，应避免晚耕晚种；(3)气象因素：病害的发生与气象因素有关，气温越高，湿度越大，越有利于叶斑病病菌的生长，从而导致叶斑病发病情况越严重；降雨早，发病期就越早；天气连续干旱，对叶斑病病菌的生长有抑制作用，因而对病害有所抑制。水鬼蕉叶斑病的发病则主要与气象因素有关，在珠三角地区高温多雨的天气中，发病尤为严重，这是由于高温高湿的天气利于水鬼蕉叶斑病病原菌的生长于发育，从而由灰霉菌与轮枝孢菌引起的叶斑病就发病情况严重。若要减弱叶斑病的病变作用，就应该需要注意各种排水、抽湿、调温的措施，使引致叶斑病的灰霉菌、轮枝孢菌不宜生长，这样就能减弱叶斑病的发生与发展。

由于珠三角地区常年湿度较大，绿植环境通风不良，容易使水鬼蕉出现叶斑病，严重影响水鬼蕉的观赏价值、绿化价值以及经济价值。查阅现有相关文献，发现对于水鬼蕉叶斑病的研究相当缺少。所以研究其因病害的影响导致观赏价值、绿化价值、经济价值的降低，绿化维护的成本增高尤为重要。若能降低水鬼蕉的叶斑病的发病程度，就能从根本上降低各种绿化维护的成本，例如：施用杀菌剂的费用；修剪病体的人工费用；更换新的绿化作物的费用等昂贵的成本；同时又保持了观赏、经济等价值。