[发明专利]TSPO在治疗脑胶质瘤中的应用及重组单纯疱疹病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及基因工程领域，公开了一种重组单纯疱疹病毒、所述重组单纯疱疹病毒的制备方法和应用。具体地，重组单纯疱疹病毒包括载体和外源核苷酸序列，载体为缺失编码ICP34.5和ICP47的基因、以及可选的缺失编码ICP6、TK和UNG的基因中的至少一种的单纯疱疹病毒，外源核苷酸序列的插入位点为载体上缺失编码ICP34.5、ICP47、ICP6、TK和UNG的基因的位置中的至少一处；外源核苷酸序列包括具有能够降低TSPO基因表达水平的核苷酸序列。以及降低脑胶质瘤细胞中TSPO基因的表达水平在制备治疗脑胶质瘤的药物中的应用。本发明的重组单纯疱疹病毒具有良好的抗脑胶质瘤效果。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及降低脑胶质瘤细胞中TSPO基因的表达水平在制备用于治疗脑胶质瘤的药物中的应用，以及重组单纯疱疹病毒及其制备方法和应用。

背景技术

脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，世界卫生组织(World HealthOrganization，WHO)将脑胶质瘤分为Ⅰ～Ⅳ四个级别，Ⅰ、Ⅱ为低级别胶质瘤，Ⅲ、Ⅳ为高级别胶质瘤，其中高级别胶质瘤的侵袭性强，患者预后更差，其中位生存期仅分别为18个月(Ⅲ)及12个月(Ⅳ)。脑胶质瘤的治疗通常采用手术切除，辅助以放疗和化疗等综合治疗；但脑胶质瘤手术难以完全切除，复发率较高，极易对放化疗产生耐受，所以脑胶质瘤患者生存期短，预后差，对人类的健康构成了极大的威胁。尽管近年来脑胶质瘤多种新兴治疗手段不断取得进展，但其预后仍不尽如人意，患者生存期仍然未有明显改善。

溶瘤病毒治疗是治疗脑胶质瘤的新型方法之一。溶瘤病毒是通过删除病毒基因组上的特定基因从而赋予溶瘤病毒选择性在肿瘤细胞内复制扩增能力，获得肿瘤杀伤效果，同时改构后的溶瘤病毒在正常细胞中无法复制，因而具备较高的安全性。溶瘤病毒适合治疗脑胶质瘤主要因为脑胶质瘤几乎发生在一个器官内部而不发生转移，有利于溶瘤病毒在局部复制和瘤内的扩增。此外，脑胶质瘤周围几乎都是有丝分裂后的细胞，溶瘤病毒更倾向于在分裂旺盛的肿瘤细胞中复制。HSV-1溶瘤病毒是最早应用在脑胶质瘤上的病毒。1991年Martuza等人删除HSV-1病毒的TK基因，实验证明HSV-1病毒能够选择性杀伤脑胶质瘤细胞系，抑制种植于小鼠的脑胶质瘤的生长并提高小鼠生存率。此后20年，约有15种溶瘤病毒在脑胶质瘤上进行测试，其中7种进入临床试验阶段，包括HSV-1溶瘤病毒1716、G207、G47Δ和M032。HSV-1溶瘤病毒成为进展最快、进入临床试验最多的溶瘤病毒。临床试验结果表明HSV-1溶瘤病毒在脑胶质瘤治疗上具有良好的安全性。

但是HSV-1溶瘤病毒有效性依然不能满足治疗需求。导致HSV-1溶瘤病毒疗效较低的原因包括脑胶质瘤的快速生长导致溶瘤病毒相对数量和复制能力的低下。因此，寻求一种能够降低脑胶质瘤生长速度以期为HSV-1溶瘤病毒提供充分的时间以杀伤脑胶质瘤细胞的方法势在必行。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的上述缺陷，提供降低脑胶质瘤细胞中TSPO基因的表达水平在制备用于治疗脑胶质瘤的药物中的应用，以及一种重组单纯疱疹病毒及其制备方法和应用。本发明提供的重组单纯疱疹病毒能够有效的降低脑胶质瘤的生长速度，并且使用后副反应小，具有良好的应用前景。

为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种重组单纯疱疹病毒，所述重组单纯疱疹病毒包括载体和外源核苷酸序列，所述载体为缺失编码ICP34.5和ICP47的基因、以及可选的缺失编码ICP6、TK和UNG的基因中的至少一种的单纯疱疹病毒，所述外源核苷酸序列的插入位点为所述载体上缺失编码ICP34.5、ICP47、ICP6、TK和UNG的基因的位置中的至少一处；

其中，所述外源核苷酸序列包括具有能够降低TSPO基因表达水平的核苷酸序列的片段。