[发明专利]悬崖菊组织培养方法

权利要求书

1.悬崖菊组织培养方法，其特征在于：所述悬崖菊组织培养方法包括：

灭菌：取悬崖菊茎尖部位，用中性洗涤剂漂洗5-8分钟，再用流水冲洗30-45分钟，然后用酒精灭菌，无菌水冲洗2-3遍，再用氯化汞溶液灭菌，无菌水冲洗2-3次，将悬崖菊茎尖切成小块；

诱导：将海绵用蒸馏水洗净并在体积分数为70-75％的酒精中浸泡20-30分钟，再用蒸馏水洗净备用；将一块海绵卷成中空的筒状体，底部固定一块圆形海绵，筒状体下部的海绵条插入装有MS培养基的罐头瓶中，培养基上放置粉状活性炭，以玻璃棒插8-10个小孔至基质底部，在每个小孔中垂直插入1-2片茎尖小块，培养8-12天；

增殖：取新鲜的MS培养基，遮光条件下依次加入蔗糖、蜂蜜、维生素B1、（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、吲哚乙酸、赤霉素混合成培养液，将经诱导培养产生的健壮茎尖组织接入培养基中培养15-18天；

移栽：将生根良好的增培苗移出培养室并置于室温下炼苗2-3天，然后向瓶内加少许水刚没过培养基，继续炼苗1-2天，小心取出小苗，冼净基部培养基，用多菌灵可湿性粉剂稀释液与高锰酸钾溶液浸泡消毒7-9分钟，取出在阴凉处晾10-15分钟后移栽到栽培基质中即可。

2.根据权利要求1所述的悬崖菊组织培养方法，其特征在于：所述灭菌步骤中酒精的质量分数为75-95%，灭菌时间为15-30秒；氯化汞的质量分数为0.08-0.12%，灭菌时间为8-12分钟。

3.根据权利要求1所述的悬崖菊组织培养方法，其特征在于：所述诱导步骤中，海绵的长度为13-15cm，宽度为13-15cｍ，厚度为0.4-0.7cm。

4.根据权利要求1所述的悬崖菊组织培养方法，其特征在于：所述诱导步骤中，粉状活性炭的厚度为0.3-0.5cm。

5.根据权利要求1所述的悬崖菊组织培养方法，其特征在于：所述诱导步骤中，培养温度为22-24℃，光照时间为12-16小时，光照强度为2500-3000lx。

6.根据权利要求1所述的悬崖菊组织培养方法，其特征在于：所述增殖步骤中，蔗糖的添加量为25-28g/L，蜂蜜为20-22g/L，维生素B1为0.1-0.15g/L，（R）-（-）-2,2-二苯基环戊醇为0.012-0.022 g/L，6-苄氨基腺嘌呤为1.0-1.2mg/L，萘乙酸为0.6-0.8mg/L，吲哚乙酸为0.6-0.8mg/L，赤霉素为0.03-0.05mg/L。

7.根据权利要求1所述的悬崖菊组织培养方法，其特征在于：所述增殖步骤中的培养添加为：光照12-14小时、光照强度2500-3500lx、温度24-26℃，黑暗10-12小时、温度15-17℃。

8.根据权利要求1所述的悬崖菊组织培养方法，其特征在于：所述移栽过程中所用多菌灵可湿性粉剂的稀释倍数为1500-2000倍液，高锰酸钾溶液的质量分数为0.022-0.025%。