[发明专利]一种预测纤维素结晶度的方法

权利要求书

1.一种预测纤维素结晶度的方法，其特征在于：

A、构建碳水化合物结合单元—荧光蛋白探针；

B、通过荧光蛋白探针与纤维素底物结合前后上清中荧光强度的变化率来表示探针与纤维素底物的结合率，通过建立二者结合能力与纤维素标准品结晶度的线性关系，利用线性关系对纤维素样品的结晶度进行预测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碳水化合物结合单元—荧光蛋白探针是先对CBM编码基因进行全基因合成获得，再与荧光蛋白编码基因融合，表达形成可以与处理过的纤维素进行结合的荧光探针。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的将合成的CBM编码基因与荧光蛋白编码基因融合表达的方法为：分别全基因合成CBM和荧光蛋白的编码基因，首先利用重叠延伸PCR将两部分基因利用5×甘氨酸连接臂进行融合；随后将融合的基因连接至带有亲和纯化标签的大肠杆菌表达载体中，并转化到大肠杆菌菌株中进行表达和亲和纯化。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白质纯化用的标签包括组氨酸标签、GST标签和MBP标签中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碳水化合物结合单元为CBM1、CBM2a、CBM3、CBM17和CBM28中的一种或多种；所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和青色荧光蛋白中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光蛋白探针与纤维素底物结合条件为：在pH范围为5.5-8.5浓度1-30mM的磷酸缓冲液中加入浓度为5-50μg/mL的荧光蛋白探针，反应温度为20-60℃，反应时间为0-100min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纤维素需经过前处理，前处理方法包括酸处理、碱处理和球磨处理中的一种或多种。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述酸处理过程是将所述纤维素在60％-85％磷酸0-25℃搅拌1-3h进行预处理，然后再加入0℃的丙酮进行搅拌，最后经洗涤和冻干得到预处理的纤维素；

所述碱处理过程是将所述纤维素在1-30％的氢氧化钠溶液中，0-25℃搅拌0-12h进行预处理，然后除去氢氧化钠之后，最后经洗涤和冻干得到预处理的纤维素；

所述的球磨处理过程是将所述纤维素的样品中加入0.4-0.6mm的玻璃珠，在20-30℃下以200-400rpm的速度处理2-12h，滤除玻璃珠后，最后经洗涤和冻干得到预处理的纤维素。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纤维素为天然纤维素或者半天然纤维素中的一种或多种。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述纤维素为微晶纤维素、α纤维素、滤纸、秸秆纤维和松木纤维的天然纤维素或者半天然纤维素中的一种或多种。