[发明专利]一种检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的试纸卡、制备及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫学检测领域，具体涉及一种检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的试纸卡、制备及其检测方法。

背景技术

猪传染性胃肠炎（TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的仔猪胃肠炎，是一种高度接触性传染病，以呕吐、严重腹泻、脱水致两周龄内仔猪高死亡率为特征的病毒性传染病。TGEV属于冠状病毒科、冠状病毒亚科α冠状病毒属1群成员。TGE多发生于冬季和春季，在全球各地区均有发生，呈地方性流行或发生于局部地区，病毒可通过直接接触、乳汁、呼吸道传播，康复猪带毒时间可长达8周，是发病猪场的主要传染源。该病通常和大肠杆菌、轮状病毒混合感染，导致哺乳仔猪和断奶仔猪死亡率增多，造成养猪业严重的经济损失。

快速准确的诊断有利于猪传染性胃肠炎的预防与控制，目前国内外已报道的用于猪传染性胃肠炎病毒抗体检测的方法有很多，主要有病原学诊断，直接和间接荧光抗体检测，补体结合试验，酶联免疫吸附试验（ELISA）以及分子生物学诊断，但均存在成本高、操作繁琐、检测周期长等缺点，且仅适用于检测机构而无法应用于实际生产生活。而在兽疫临床疾病诊断和检验检疫中，通常应用于养殖场和广大基层单位，面对大批量样本、大面积普查和现场诊断的需求，免疫胶体金技术是现在市场上应用最广泛的。胶体金技术虽然有快捷、方便、无需特殊仪器等优势，但也存在不足之处：胶体金标记方式静电吸附，稳定性差；胶体金技术结果判定以肉眼识别，误差大、灵敏度低。在胶体金技术基础上发展的以荧光微球作为示踪物的免疫层析技术，逐渐进入科研领域，目前利用此项技术检测猪传染性胃肠炎抗体仍是空白，如何利用该技术制备灵敏性、稳定性等更佳的检测产品以应用于养殖业实现大批量精准测定仍是科研工作者奋力的目标。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的试纸卡、制备及其检测方法，为系统化、便捷化、规范化地检测猪传染性胃肠炎病毒抗体提供一种新方法。

检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的试纸卡，包括卡壳和设在卡壳内的试纸条；卡壳包括相互扣合的卡盖和卡座；试纸条包括底板以及依次搭接粘贴在底板上的吸水垫、检测垫、结合垫和样品垫；卡盖上对应于检测垫的区域设有视窗，卡盖上对应于样品垫的区域设有加样孔，卡座内设有固定试纸条的卡槽；所述底板为不吸水的PVC板，吸水垫为吸水滤纸；其特征在于：所述检测垫为设有质控线C和检测线T的硝酸纤维素膜，质控线C包被羊抗鼠单克隆抗体，检测线T包被灭活的猪传染性胃肠炎病毒；所述结合垫为包埋时间分辨荧光微球标记的抗猪传染性胃肠炎病毒E2蛋白单克隆抗体的玻璃纤维素膜；所述样品垫是经样品垫处理液浸泡处理后干燥的玻璃纤维素膜。

进一步的，在所述卡盖上设有从吸水垫方向指向样品垫方向的指示箭头。

进一步的，所述质控线C和检测线T是将包被液划膜于检测垫制得，其中，羊抗鼠单克隆抗体包被液的浓度为0.5mg/ml，猪传染性胃肠炎灭活病毒包被液的浓度为0.3mg/ml。

进一步的，所述时间分辨荧光微球为直径200 nm的含有高亮稀土染料的羧基聚苯乙烯微球。

进一步的，所述结合垫是将荧光微球-抗体复合物溶液喷至玻璃纤维素膜上制得，所述荧光微球-抗体复合物溶液中，抗E2蛋白单克隆抗体的标记量是20μg/ml。

进一步的，所述样品垫处理液为pH 8.0 的PBS缓冲液，其中含有的成分及其浓度分别为：质量分数为0.5%的蔗糖，质量分数为0.5%的PVP-K30，质量分数为0.5% 的PEG-20000，体积分数为2%的Tween-20。

本发明还保护制备上述检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的试纸卡的方法，包括以下步骤：

检测垫的制备：制备浓度为0.5mg/ml的羊抗鼠单克隆抗体包被液和浓度为0.3mg/ml的灭活的猪传染性胃肠炎病毒包被液，将两种包被液各自单独倒吸至划膜机管线中，在硝酸纤维素膜上均按照0.8μl/cm划线，其中，羊抗鼠单克隆抗体包被液划出质控线C，灭活的猪传染性胃肠炎病毒包被液划出检测线T；然后将经划线的硝酸纤维素膜置于37℃鼓风干燥箱中干燥3-4 h，制得检测垫；