[发明专利]丹参脱毒苗的工厂化繁育方法

说明书

技术领域

本发明涉及丹参脱毒苗的工厂化繁育方法，特别是品质退化严重、产量降低、资源稀缺丹参野生种、栽培种或变异种的工厂化繁育方法，属于植物品种繁育技术领域。

背景技术

丹参(Salvia miltiorrhza Bunge)是大宗中药材之一，具有显著的活血化瘀功效，被广泛用于治疗冠心病、心绞痛、缺血性中风等疾病。目前我国以丹参为原料生产的复方中药有100多种，涉及的企业百余家，对优质丹参药材的需求量巨大。但由于常年采挖，丹参野生资源日益减少。目前市场供应的丹参主要以栽培种为主，但在丹参主产区，由于种苗生活力退化、重茬等因素影响，致使丹参的产量非常不稳定。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高效、快速的工厂化丹参脱毒种苗繁育方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种丹参脱毒苗工厂化繁育方法，由以下步骤组成：

(1)选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理；

(2)丹参嫩叶或茎尖在初始诱导增殖培养基中培养；

(3)丹参愈伤组织在分化培养基中的分化培养；

(4)丹参幼苗在根诱导培养基中的根诱导培养；

(5)丹参幼苗的炼苗；

(6)丹参幼苗的大田移栽。

所述步骤(1)选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理的方法是：选取丹参嫩叶或茎尖进行脱毒处理。

所述步骤(2)丹参嫩叶或茎尖在初始诱导增殖培养基中培养的方法是：将脱毒处理的丹参嫩叶或茎尖置于初始增殖培养基中，24±2℃(优选25℃)无菌室中，光照培养20～30天(优选25天)进行脱分化增殖培养，光强度为1000～3000Lx(优选1000Lx)，光照周期2-3h(光)/22～21h(暗)(优选1h(光)/22h(暗))获得丹参愈伤组织；

所述步骤(3)丹参愈伤组织在分化培养基中的分化培养的方法是：将获得的丹参愈伤组织切割成0.2～0.3cm2(优选0.25cm²)小块置于诱导培养基中进行诱导分化培养，培养条件为：24±2℃(优选25℃)，光照时间为16～18h小时(优选18小时)，获得分化的丹参幼苗；

所述步骤(4)丹参幼苗在根诱导培养基中的根诱导培养的方法是：将获得的丹参幼苗转移至根诱导分化培养基中进行根诱导培养，培养条件：24±2℃(优选23～25℃)，光照时间为16～18h小时(优选18小时)；

所述步骤(5)丹参幼苗的炼苗方法是：丹参幼苗根长至2～3厘米，叶片6～8片时将培养瓶打开，进行一级炼苗处理3～4天(优选3天)；将经过一级炼苗处理的丹参幼苗，从培养基中移出，用水冲洗除掉幼苗植株上带有的培养基，将其移栽至营养土：蛭石(4∶1～2∶1体积比，优选3∶1体积比)的混合土中，置于24±2℃(优选25℃)温室大棚中，大棚湿度50～70％(优选60％)，进行二级炼苗处理12～18天(优选15天)；

所述步骤(6)丹参幼苗的大田移栽的方法是：将在温室中复壮的丹参幼苗连同结合的混合土一起移栽置大田中；移栽当天浇足水，后期田间管理同常规种苗。

进一步优选的丹参脱毒苗工厂化繁育方法如下：

所述步骤(1)中的脱毒处理方法为依次用70～75％酒精漂洗30～50秒，无菌水漂洗1～2分钟，0.1％升汞处理漂洗8～10分钟，无菌水漂洗4～5次，每次1～2分钟。

优选的，所述步骤(1)中的脱毒处理方法为依次用75％酒精漂洗30秒，无菌水漂洗1分钟，0.1％升汞处理漂洗8分钟，无菌水漂洗5次，每次1分钟。

所述步骤(1)中嫩叶为最靠近丹参茎端分生区，新长出的第1～2片叶片；茎尖为丹参茎最端部的分生区，长度为0.2～0.4cm。

优选的，所述步骤(1)中嫩叶为最靠近丹参茎端分生区，新长出的第2～3片叶片；茎尖为丹参茎最端部的分生区，长度为0.3cm。

所述步骤(2)中所述的初始增殖培养基组成为1/2MS培养基、20～40g/L白糖、5.5～7g/L琼脂粉、0.3～1mg/L 6一BA(6-苄氨基嘌呤)、0.1～0.3mg/L NAA(1-萘乙酸)，pH值5.8～6.0；丹参嫩叶或茎尖的脱分化增殖培养组成为1/2MS、20～40g/L白糖、5～7g/L琼脂、1～2mg/L6-BA，pH值5.8～6.0。

优选的，所述步骤(2)中所述的初始增殖培养基的组成为1/2MS、30g/L白糖、6g/L琼脂粉、0.5mg/L 6-BA、0.2mg/LNAA，pH值5.8。