[发明专利]一种测定降钙素含量的试剂盒及其测试方法

说明书

本发明公开了一种采用磁微粒化学发光法测定人血清中降钙素(CT)含量的试剂盒。试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；其中抗试剂异硫氰酸荧光素标记的降钙素包被抗体和碱性磷酸酶标记的降钙素标记抗体；磁微粒试剂为磁微粒与羊抗FITC连接物。本发明将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，并且采用了一步法反应模式，使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间少于35min,明显快于同类试剂盒；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现降钙素的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，具体涉及一种采用磁微粒化学发光法测定人体中降钙素(CT)含量的试剂盒。

背景技术

降钙素(calcitonin，CT)是一种含有32个氨基酸的直线型多肽类激素，在人体里是由甲状腺的滤泡旁细胞(parafollicular cells，又称C细胞)制造。在鱼类、爬虫类、鸟类、哺乳类身上都有发现这种激素。主要功能是降低血钙。但降钙素通常对于调节人体血液中钙离子(Ca²⁺)的恒定并没有很显著的重要性。是由甲状腺C细胞分泌的。换言之，甲状腺C细胞是分泌降钙素的内分泌细胞。胞体较大，呈圆形、卵圆形或不规则形，单个嵌在甲状腺滤泡壁上，贴近基膜，或成群散在滤泡间组织中，又称滤泡旁细胞。CT应用于临床，主要是判断代谢性骨病的骨吸收状态，检测和评价抗骨吸收药物的疗效。降钙素影响了钙离子和磷酸盐的代谢过程，其功能多半是拮抗甲状旁腺素的作用。降钙素主要透过下列四种方式降低血钙浓度：抑制小肠对于钙离子的吸收；抑制破骨细胞(Osteoclast)，减少骨骼中的钙离子流失到血液中；抑制肾小管对磷酸根的重吸收作用，抑制肾小管对钙离子的重吸收作用，增加钙离子自尿液流失。

目前已知的降钙素测定方法有放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、胶乳增强比浊法等。放射免疫法步骤繁琐，试剂价格昂贵，需使用配套的仪器且存在放射性污染。酶联免疫吸附法存在检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要。胶乳增强免疫比浊法操作简单、快速，但是灵敏度低、低值重复性差。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种准确度高的采用磁微粒化学发光法测定人血清中降钙素(CT)含量的试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

一种测定降钙素含量的试剂盒，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；

所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制成，所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成；

分别配制校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；将校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物，独立地置于包装容器内，得到降钙素的定量测定试剂盒；

(一)、所述校准品、质控品的配制，包括以下步骤：

用校准品缓冲溶液溶解降钙素抗原，配制抗试剂的校准品和质控品；其中，所述校准品缓冲溶液是通过在1L的新生牛血清中加入0.01g～0.05g的四环素和0.1g～0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成；

(二)、所述抗试剂的配制：

1)抗试剂缓冲液的制备：

将10g～20g的Na₂PO₃H·12H₂O、1～2g的NaPO₃H₂·12H₂O、1g～5g的绵羊血清、3g～10g的新生牛血清、1g～5g的马血清加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用4M HCl调节pH至5～6，制得所述抗试剂缓冲液；