[发明专利]一种抗白介素6的人ScFv单链抗体

说明书

本发明公开了一种抗白介素6的单链抗体的蛋白质，所述单链抗体具有高度特异性的抗原识别能力，所述单链抗体蛋白既具有抗体的特异性识别作用，同时这种识别性又可以被特异性受体阻断，而且该抗体融合蛋白的分子量小，可以在原核细胞表达系统中表达，大大降低了抗体药物的生产成本。

技术领域

本发明公开了一种抗IL6人ScFv单链抗体，属于免疫学和分子生物学领域。

背景技术

炎症尤其是慢性炎症对机体有着巨大的损害，炎症部位长时间释放大量细胞因子和炎症介质，不仅引起局部组织器官病变，使患者产生痛苦，而且长时间的炎症更容易导致肿瘤发生。在炎症中较为常见的两种细胞因子为肿瘤坏死因子α和白细胞介素6，针对这两个因子研发的抗体药物也已经上市，如治疗类风湿性关节炎的阿达木单抗。

白细胞介素-6(Interleukelin-6，IL-6)是具有多种生物学活性的细胞因子，也是机体复杂的细胞因子网络中的关键因子，它可以调节其他细胞因子的作用，在发生炎症、坏死或由于肿瘤细胞抗原刺激免疫细胞分泌IL-6 增高等情况下，血清中IL-6增加，过量表达IL-6往往与某些疾病相关(Keto 等，1997)。由于IL-6所具有的广泛的生物学活性和潜在的临床应用前景，受到广泛关注，从发现至今国内外学者对其结构、生物学特性、作用机制及临床应用等做了大量研究。

单核巨噬细胞是免疫系统的第一道防线，能独立鉴定抗原并提供信息传递，从而诱发免疫反应，在这些过程中释放一系列单核因子包括肿瘤坏死因子(TNFa)、白细胞介素一6(IL-VI)、白细胞介素-1(IL-I) 等，亦称前炎性细胞因子。

抗体药物已作为炎症患者常规的治疗药物之一，预计2020年，单抗药物的销售额将达到2000亿美元。自从1984年第一个基因工程抗体人 -鼠嵌合抗体诞生以来，新型基因工程抗体不断出现，如人源化抗体、单价小分子抗体(Fab、单链抗体、单域抗体、超变区多肽等)、多价小分子抗体(双链抗体，三链抗体，微型抗体)、某些特殊类型抗体(双特异抗体、抗原化抗体、细胞内抗体、催化抗体、免疫脂质体)及抗体融合蛋白(免疫毒素、免疫粘连素)等等。另外，用于制备新型抗体的噬菌体抗体库技术成为继杂交瘤技术之后生命科学研究中又一突破性进展。

目前小分子抗体开发成药物主要以两种形式为主，一种是抗体偶联复合物(Antibody conjugate complex，ADC)，另一种是双特异抗体。抗体-药物偶联物是一种新型的靶向治疗，比如抗肿瘤治疗中，ADCs由一个抗体或一个抗体片段ScFv连接着一个有效载荷的药物(通常是毒素) 形成一个免疫复合物。抗体使这个免疫复合物结合到特定的肿瘤细胞上，通常这个免疫复合物会内化到肿瘤细胞内部，然后药物释放到细胞内引起肿瘤细胞损伤和死亡。抗体偶联复合物虽然具有很好的肿瘤识别能力和抗瘤效应，但是其制备过程中需要与另外的化学基团偶联，不仅增加了制备成本，还难以保证产物的均一性，偶联的化学基团与抗体的抗原识别区往往还容易产生空间位阻效应，有时对机体还具有毒副作用，这些因素都影响抗体偶联复合物实际的抗瘤效果。

最新的肿瘤生物治疗方法CAR-T是目前认为最有效的肿瘤治疗手段。但是这种方法如果运用不当会出现一种非常严重的副反应细胞因子风暴，这种症状还可以出现在外伤、感染等多种疾病中。细胞因子风暴 (cytokine storm)是指机体感染微生物后引起体液中多种细胞因子如 TNF-α、IL-1、IL-6、IL-12、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MCP-1和IL-8等迅速大量产生的现象，是引起急性呼吸窘迫综合症和多器官衰竭的重要原因。如果能在细胞因子大量升高初期及时阻断这些因子的生物学功能，就可减轻对机体的损伤。

本发明抗白介素6单链抗体识别并阻断IL6的生物学功能，从而达到降低炎症反应的作用。

发明内容