[发明专利]一种小血藤功能性有效成分的检测方法及应用

说明书

本发明属于中药成分检测技术领域，公开了一种小血藤功能性有效成分的检测方法及应用，包括分别制备芦丁、五味子甲素和五味子乙素的标准品溶液，制备供试品溶液，HPLC检测等步骤，其中HPLC检测色谱条件如下：以甲醇‑1％冰醋酸溶液为流动相洗脱液，梯度洗脱90min，洗脱各时段对应的洗脱液中甲醇体积分数分别为：0‑20min时为20％；20‑40min时为40％；40‑60min时为60％；60‑80min时为80％，80‑90min时为100％；流速为1mL/min，检测波长为257nm。本发明使用梯度洗脱的HPLC检测，可同时测定小血藤中三种功能性有效成分，能够较为全面反映出小血藤的药效。

技术领域

本发明属于中药成分检测技术领域，具体涉及一种小血藤功能性有效成分的检测方法及应用。

背景技术

小血藤(Schisandra Propinqua(Wall.)Baill.Var.Sinensis Oliv.，Dchisandrapropingua var.sinensis)又名铁箍散，为木兰科五味子属落叶性木质藤本植物。其以根、藤茎及叶入药。文献报道小血藤主要含有表恩施辛，恩施辛(enshicine)，异五味子酸(isoschizandrolic acid)，去氧五味子素(deoxyschizandrin)，β-谷甾醇(β-sitosterol)，硬脂酸(stearic acid)等化学成份。我们通过薄层色谱法发现其含有较多的芦丁、五味子甲素和五味子乙素。芦丁、五味子甲素和五味子乙素为功效确切的药效成分，它们是现今中国药典中较多中药的质量控制指标，如芦丁为中国药典一部收载的槐花等中药的质量控制指标成分，五味子甲素和五味子乙素为临床常用药物护肝片等中药的质量控制指标成分。芦丁、五味子甲素和五味子乙素具有抗氧化、保肝降酶等多种药理活性。

中国传统医学认为，小血藤味辛性温，具有祛风活血、解毒消肿、止血的功效，这些功效与芦丁、五味子甲素和五味子乙素具有的药理作用类似。然而中国药典没有收载小血藤的质量控制方法及功能性有效成分检测指标，不能有效控制小血藤药材的质量，进而使含小血藤药材的中成药质控方法存在缺陷。为控制小血藤的质量，以更好的保证临床用药的安全，有必要建立一种能够同时测定小血藤中多种具有药效的有效成分的方法，实现小血藤及含小血藤中成药的质量管控。

发明内容

本发明提供的一种小血藤功能性有效成分的检测方法及应用，能够同时测定小血藤中多种具有药效的有效成分芦丁、五味子甲素和五味子乙素含量，实现小血藤及含小血藤中成药的质量管控。

本发明的目的是提供一种小血藤功能性有效成分的检测方法，包括以下步骤：

S1，分别制备芦丁、五味子甲素和五味子乙素的标准品溶液：

S2，制备供试品溶液

称取小血藤10-10.5g，加入甲醇45-55mL，超声30-40min，冷却，过滤，收集滤液并浓缩，得到浓缩液；将浓缩液转移于容量瓶中，加甲醇定容至，摇匀，过滤，收集的滤液再用微孔滤膜过滤，收集微孔滤膜过滤后的即为供试品溶液；

S3，HPLC检测

色谱条件：以甲醇-1％冰醋酸溶液为流动相，梯度洗脱90min，洗脱各时段对应的洗脱液中甲醇体积分数分别为：0-20min时为20％；20-40min时为40％；40-60min时为60％；60-80min时为80％，80-90min时为100％；流速为1mL/min，检测波长为257nm；

其中，1％冰醋酸溶液中冰醋酸的体积分数为1％，溶剂为双蒸水。

优选的，上述小血藤功能性有效成分的检测方法，S1中，芦丁标准品溶液制备方法如下：精确称取芦丁标准品0.0091g于10mL容量瓶中，加入甲醇定容至10mL，即得0.91mg/mL的芦丁标准品溶液；