[发明专利]一种山茶科花类组培繁殖方法

说明书

本发明公开了一种山茶科花类组培繁殖方法，包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取山茶科花类子株作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得山茶科花类愈伤组织，再将山茶科花类愈伤组织转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长2‑3cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根山茶科花类，生根率达到95%以上。本发明通过对山茶科花类的茎尖进行诱导、增殖、生根，快速获得山茶科花类组培苗，生根快，缩短了山茶科花类组培时间，成本低，同时提高了山茶科花类成活、分化和生根率，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

技术领域

本发明涉及植物栽培技术领域，涉及一种山茶科花类组培繁殖方法。

背景技术

杜鹃红山茶、越南抱茎茶(高继银等，2005)和崇左金花茶(梁盛业等， 2010)均为山茶科迄今为止发现的花期最长(几乎可达全年)的3种山茶原种，又称四季茶花。不仅是育种专家用来培育四季开花的茶花新品种的最佳亲本(高继银等，2010)，而且有非常高的观赏价值，(罗燕英，2009)认为在家庭盆栽、园林绿化具有广阔的应用前景。为了形成山茶科花类规模化生产，探索出一种适合山茶科花类组织快繁的方法是很有必要的。

发明内容

本发明是为了克服现有技术的不足，提供一种生长周期短，生长效果好，扩繁快的山茶科花类组培繁殖方法。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种山茶科花类组培繁殖方法，包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取山茶科花类子株作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得山茶科花类愈伤组织，再将山茶科花类愈伤组织转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长2-3cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根山茶科花类；主要包括如下步骤：

（1）外植体处理：选取山茶科花类子株作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在600mg/L赤霉素溶液中浸泡15-20min，用清水洗净后用体积浓度0.15 % 高锰酸钾溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；

（2）诱导培养：将步骤（1）处理后的山茶科花类子株的茎段接种到诱导培养基中培养，光照培养，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度25-28℃，培养时间25-28d，培养得到山茶科花类愈伤组织；

（3）增殖培养：将步骤（2）中诱导得到的山茶科花类愈伤组织转接到增殖培养基中，光照时间10-12h/d，光照强度3000-3500lx，培养温度25-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；

（4）生根培养：将步骤（3） 中分化出的芽长至2-3cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间10h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度25-28℃，培养时间20-30d，得到生根山茶科花类。

以上步骤（2）所述的诱导培养基的配方为：改良LS培养基+IAA 6.0-8.0 mg/L+KT2.0-3.0 mg/L +VC 15 mg/L +聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+VB₂ 15 mg/+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖20g/L。

以上步骤（3）所述的增殖培养基的配方为：改良LS培养基+IAA 3.0-5.0 mg/L+NAA1.5-2.0 mg/L+ZT 0.1-0.5 mg/L+脯氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+琼脂粉 3.6g/L+蔗糖 30 g/L。

以上步骤（4）所述的生根培养基的配方为：改良LS培养基+IAA 1.5-2.0 mg/L+NAA0.5-1.0 mg/L+VC 10 mg/L+VB₂ 20 mg+脯氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30mg/L+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。