[发明专利]一种甲基营养型芽孢杆菌B18及其颗粒剂和应用

说明书

本发明公开了一种甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)B18及其颗粒剂和应用，该菌株已经于2017年9月18日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.14641。本发明还提供了甲基营养型芽孢杆菌B18颗粒剂，按重量百分含量包括：种子发酵液10％，固态发酵制剂15％，粘合剂15％，载体补足100％。本发明提供的甲基营养型芽孢杆菌B18及其颗粒剂对杜仲根腐病有特效，适宜于商品化生产，对环境亲和性好，具有可持续、成本低的特点。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种甲基营养型芽孢杆菌B18菌株及其颗粒剂和在杜仲根腐病防治上的应用。

背景技术

杜仲，属于杜仲科杜仲属多年生落叶乔木，该科仅有1属1种植物，是我国仅存的第三纪孑遗植物，属国家二级保护名贵经济树种，还是我国特产树种和著名药材。杜仲有近千年的栽培历史，实用型极强，在我国亚热带至温带的27个省均可种植，主要产于四川、云南、贵州、湖南、湖北、陕西、江苏及浙江等省。杜仲被列为贵州地道中药材GAP基地示范品种之一。它全身都是宝，用途广泛，具有极大的药用价值和经济价值。杜仲被成为神奇之树，其叶、雄花、果实和树皮都含有许多人体不可缺少的活性物质，这些活性物质具有十分独特的医疗保健功能，在促进体内胶原蛋白的合成、抗衰老、降血压、抗疲劳、人体免疫调节、预防细胞癌变、降低血脂和胆固醇、治疗心脑血管疾病，补肝肾等方面有独特的功效，并且无毒副作用树皮可以入药，有滋补肝肾、强健筋骨、治疗腰膝痛和高血压等功效。树皮、叶和果实还能提取杜仲胶(又名硬橡胶)，可代替橡胶用，是世界上十分珍贵的优质天然橡胶资源。还可以加工成各种优质饮料。另外，杜仲的木材纹理直行、结构细致，不翘不裂，是制造家具和其他木制品的优质材料。目前国内外市场需求量大，皮、叶价格逐渐上涨。

在杜仲苗期，根腐病发生尤为严重。初期支根和须根感病，逐渐向主根扩展。主根早期不表现症状，后随着腐烂程度的加剧，吸收水分和养分的功能逐渐减弱，地上部分新叶首先发黄，地下部分发黑腐烂。病情严重时，整株叶片发黄、枯萎，根皮变褐，并与髓部分离，最后全株死亡。目前，在该病防治手段上主要以土壤消毒、营林措施、化学防治为主，但化学农药对环境污染较大，且易残留；对人畜安全、环境友好的生物防治并未涉及。这项技术是利用生态平衡原理，引进有益微生物或其产物，达到稳定、长期、有效控制病害的目的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术在防治杜仲根腐病中的缺陷，提供了甲基营养型芽孢杆菌B18菌株及其颗粒剂的制作方法和在杜仲根腐病中的应用。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)B18菌株于2016年11月20日采用平板稀释涂布法分离于四川大邑仰天窝药场健康杜仲树皮，已经于2017年9月18日保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.14641。

本发明甲基营养型芽孢杆菌B18在NA平板培养基上培养了2d的单菌落呈白色，圆形，边缘不整齐，表面干燥，有褶皱，无粘性，不透明。

本发明甲基营养型芽孢杆菌B18的16S rDNA的序列为：SEQ ID NO:1。

本发明以甲基营养型芽孢杆菌B18为活性成分的颗粒剂，按重量百分比包括以下组分：种子发酵液10％，固态发酵制剂15％，粘合剂0.3％羧甲基纤维素钠15％，载体草木灰补足100％，所述的种子发酵液和固态发酵制剂均是通过以甲基营养型芽孢杆菌B18为菌种，经种子培养、发酵培养得到。

本发明所述的以甲基营养型芽孢杆菌B18为活性成分的颗粒剂中含活芽孢数不低于1×10⁸cfu/g。

本发明还提供了以甲基营养型芽孢杆菌B18为活性成分的颗粒剂的制备方法，具体包括以下步骤：