[发明专利]一种高效表达的猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因及其应用

说明书

本发明公开一种高效表达的猪圆环病毒2型Cap‑穿膜肽融合蛋白基因及其应用，该融合蛋白的编码基因为(1)～(3)中的任意一种：(1)融合穿膜肽TAT基因序列的Cap基因；(2)融合穿膜肽ppTG20基因序列的Cap基因；(3)融合蜜蜂信号肽HBM基因序列的Cap基因。本课题组研究发现，穿膜肽与pVAX‑Cap质粒混合制备的DNA疫苗能提高其在小鼠体内的免疫应答水平。本研究将TAT、ppTG20，HBM与PCV2 Cap蛋白N端融合，成功构建重组杆状病毒，实现了Cap蛋白有效表达，为PCV2基因工程疫苗研究奠定了基础。

技术领域

本发明属于生物免疫技术领域，具体涉及一种高效表达的猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因及其应用。

背景技术

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是危害世界养猪业的重要病原。PCV2ORF2基因编码的衣壳cap蛋白具有重要免疫保护作用，是目前研发的PCV2重组亚单位疫苗的重要抗原基因。PCV2重组杆状亚单位疫苗已经实现商品化，但疫苗生产成本较高。很多分子佐剂，比如一些细胞因子，IL-18，GMSF等都与免疫原共同刺激机体产生良好的免疫应答，从而提高疫苗的免疫效果。

蜜蜂蜂毒素分泌信号肽(Honey Bee Melittin secretion peptide，HBM)具有帮助靶基因分泌表达的作用，使重组蛋白具有完整的生物学功能。穿膜肽(Cell PenetratingPeptide，CPP)可以投递治疗物质进入细胞，人免疫缺陷病毒Tat蛋白中含有的TAT肽是最先被发现的穿膜肽，可以有效地穿越细胞膜。已有研究证明，药物、多肽或者蛋白、寡核苷酸/DNA/RNA、纳米粒、脂质体、细菌噬菌体、荧光染料、量子点等物质可以被有效地投递到细胞内。由于CPPs投递靶物质范围广泛，并且可以将抗原投递给抗原递呈细胞(APC)，提高机体免疫应答，所以，它在疾病治疗和疫苗领域有着巨大潜力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因。

本发明的另一目的在于提供一种猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白。

本发明的另一目的在于提供上述猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白的应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因，该基因为(1)～(3)中的任意一种：

(1)融合穿膜肽TAT基因序列的Cap基因；

(2)融合穿膜肽ppTG20基因序列的Cap基因；

(3)融合蜜蜂信号肽HBM基因序列的Cap基因。

上述的猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因，其在于：

所述融合穿膜肽TAT基因序列的Cap基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述融合穿膜肽ppTG20基因序列的Cap基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述融合蜜蜂信号肽HBM基因序列的Cap基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

上述的猪圆环病毒2型Cap-穿膜肽融合蛋白基因，其在于：