[发明专利]一种靶向抑制绿色荧光蛋白GFP基因表达的siRNA序列

说明书

技术领域

本发明涉及基因沉默技术领域，特别涉及一种靶向抑制绿色荧光蛋白GFP基因表达的siRNA序列。

背景技术

绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)来自发光水母(Aequoreavictoria),其蛋白大小27kDa，由238个氨基酸构成,自身是一个生物发光系统,附带有激发后能发射生物荧光的发光色基,其发光过程不同于其它生物发光组织,是不需荧光素酶参与的。光激发GFP荧光是一个特异性的独立过程,并不需要任何的协同因子、底物或其它来自于水母的基因表达产物。GFP蛋白作为标记物，广泛的应用于目标蛋白的标记物，GFP基因在N或C末端与异源基因接合构成编码融合蛋白的嵌合基因,其表达产物既保持了外源蛋白的生物活性,又表现出与天然GFP相似的荧光特性(Wang & Hazelrigg,1994；Marshallet al.,1995；Stearns,1995)。GFP作为荧光标签蛋白主要应用于活体或细胞离体内追踪某一特定蛋白的合成、运输和定位研究分析。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由内源或外源双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)引发的转录后基因沉默机制，这种基因沉默机制具有高度特异性、高效性、持久性的特点。RNAi机制本身是自然界中一种普遍的现象，是一种高度保守的抵御机制。

在进行RNAi实验过程中，需要制备siRNA，设计高效的siRNA序列是RNAi实验成败的前提。目前研究主要集中在对哺乳动物细胞，进行高效的siRNA序列的设计和实验鉴定；而对于鱼类细胞系siRNA的序列专一性要求非常严谨，与靶mRNA之间一个碱基错配都会显著削弱基因沉默的效果。

发明内容

本发明公开一种靶向抑制绿色荧光蛋白GFP基因表达的siRNA序列，本发明所设计的针对GFP蛋白的SiRNA序列在鱼类细胞系(CIK)中能够利用RNAi机制高效的抑制GFP蛋白的表达。

为解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

一种靶向抑制绿色荧光蛋白GFP基因表达的siRNA序列,其特征在于：所述的siRNA序列为：

有义链：

5’-GAUCCG-CACAAGCUGGAGUACAACU-UUCAAGAGA-AGUUGUACUCCAGCUUGUG-UUUUUUGGAAA-3；

反义链：

3’-GC-GUGUUCGACCUCAUGUUGA-AAGUUCUCU-UCAACAUGAGGUCGAACAC-AAAAAA-CCUUUUCGA。

所述siRNA的克隆载体为pSilencer2.1-U6neo。

述的pSilencer2.1-U6neo长度为4521bp。

所述pSilencer2.1-U6neo的克隆位点为BamHⅠ/HindⅢ。

所述的siRNA用于鱼类细胞系中。

进一步的，所述绿色荧光蛋白GFP的基因序列为：