[发明专利]一种检测母猪初乳中sIgA的试剂盒

说明书

本发明提供一种检测母猪初乳中sIgA的试剂盒，属于生物技术领域。检测母猪初乳中sIgA的试剂盒，包括猪sIgA‑Fc蛋白纳米抗体51溶液和辣根过氧化物酶标记的猪sIgA‑Fc蛋白纳米抗体72溶液；所述猪sIgA‑Fc蛋白纳米抗体51的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述猪sIgA‑Fc蛋白纳米抗体72的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明检测母猪初乳中sIgA水平的试剂盒，制备方法简单、制作成本低、特异性强、灵敏度高、稳定性好。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测母猪初乳中sIgA的试剂盒。

背景技术

动物黏膜免疫系统是机体整个免疫网络的重要组成部分，是具有其独特结构和功能的独立免疫体系。黏膜免疫防御着外界病原体对机体的入侵，是动物机体防御感染的第一道防线，因此黏膜免疫在预防动物传染病中发挥了巨大的作用。在黏膜免疫机制中，免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,IgA)起着举足轻重的作用。其中，分泌型免疫球蛋白A(Secretory Immunoglobulin A,SIgA)是机体黏膜局部抗感染免疫的主要效应因子，又称为黏膜局部抗体。IgA有单体、双体和多聚体之分，血清中以7S的单体即血清型IgA为主，分泌液中以11S的双体即sIgA为主。sIgA的主要功能有：阻抑黏附、免疫排除、溶解细菌、中和病毒、介导ADCC、抗炎症、促进天然因子的作用以及调节黏膜免疫反应。它是机体黏膜防御系统的主要成分，在黏膜免疫中发挥关键作用，主要由J链连接的IgA二聚体以及分泌片段(SC)结合后形成，分子量约400KDa，多见于胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道和口腔/鼻腔粘膜部位。因此，机体黏膜sIgA的分泌水平对机体黏膜免疫应答具有重要的保护意义。

仔猪在出生时体内没有免疫球蛋白，出生后通过摄取母猪的初乳而获得免疫球蛋白。初乳中免疫球蛋白主要是IgA，且以分泌型的sIgA为主。新生仔猪摄取初乳后经肠上皮进入循环，为机体提供了来自母猪的免疫球蛋白，进入仔猪消化道的病毒是通过与初乳中的抗体在肠道不断中和而起主要保护作用的。所以，通过检测妊娠母猪初乳中的sIgA水平，是目前预防、监控和诊断新生仔猪疾病的主要手段，对妊娠母猪疫苗免疫效果评价、哺乳仔猪免疫程序的制定和流行状态检测具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测母猪初乳中sIgA水平的试剂盒，该试剂盒制备方法简单、制作成本低、特异性强、灵敏度高、稳定性好。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

检测母猪初乳中sIgA的试剂盒，包括猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体51溶液和辣根过氧化物酶标记的猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体72溶液；所述猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体51的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体72的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

优选的技术方案中，所述猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体51的浓度为0.2-2.0mg/mL，辣根过氧化物酶标记的猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体72的浓度为20-100μg/mL。

在本发明中，所述猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体51采用如下方法制备：将猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体51的编码基因插入pMECS载体，然后导入大肠杆菌WK6感受态细胞，获得重组菌A；诱导重组菌A表达目的蛋白，裂解重组菌A后纯化获得纳米抗体51。

优选的技术方案中，猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体51的编码基因序列如SEQ ID NO:2所示。

在本发明中，所述辣根过氧化物酶标记的猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体72采用如下方法制备：将猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体72的编码基因插入pMECS载体，然后导入大肠杆菌WK6感受态细胞，获得重组菌B；诱导重组菌B表达目的蛋白，裂解重组菌B后纯化获得纳米抗体72；采用辣根过氧化物酶标记纳米抗体72。

在本发明中，猪sIgA-Fc蛋白纳米抗体72的编码基因序列如SEQ ID NO:4所示。