[发明专利]一种高效制备成熟红细胞的方法以及用于制备成熟红细胞的培养基

权利要求书

1.一种高效诱导造血干细胞/祖细胞分化为成熟红细胞的方法，其包括：

造血干细胞/祖细胞红系扩增和分化步骤；以及

造血干细胞/祖细胞红系分化脱核步骤。

2.根据权利要求1的方法，其中，所述红系扩增和分化步骤使用造血干细胞红系扩增和分化培养基对造血干细胞进行培养。

3.根据权利要求1的方法，其中，所述红系分化脱核步骤使用红系分化脱核培养基。

4.根据权利要求2或3的方法，其中，所述造血干细胞红系扩增和分化培养基包含：基础培养基，以及生长因子的组合物。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述生长因子的组合物包括：

干细胞生长因子，即SCF；

白介素3，即IL-3；以及

促红细胞生成素，即EPO。

6.根据权利要求2或3的方法，其中所述红系分化脱核培养基包含基础培养基、生长因子、以及孕酮受体和糖皮质受体的拮抗剂和/或抑制剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述生长因子包括促红细胞生成素，即EPO，所述孕酮受体和糖皮质受体的拮抗剂和/或抑制剂为选自下述化合物(I)～(IV)中的任一种或两种及以上：

8.根据权利要求1～7中任一项的方法，其中诱导造血干细胞/祖细胞分化为成熟红细胞的时间为10-18天、11-17天、12-16天、13-15天、10-17天、10-16天、10-15天、10-14天。

9.根据权利要求8的方法，其中所述的成熟红细胞特异表达细胞膜蛋白GPA和CD71双阳性的比例为90％以上。

10.根据权利要求8的方法，其中所述的成熟红细胞细胞脱核的效率为20％以上。

11.权利要求1-10中任一项所述的方法制备的成熟红细胞。

12.权利要求11的成熟红细胞，其为GPA和CD71双阳性。

13.权利要求12的成熟红细胞，其为脱核红细胞。

14.包含权利要求13的成熟红细胞的血液制品。

15.权利要求13或14的成熟红细胞或血液制品在制备治疗输血供体短缺及血液疾病的药物中的用途。

16.一种造血干细胞/祖细胞红系扩增和分化培养基，其包括：

基础培养基，以及

生长因子的组合物，其中，

所述生长因子的组合物包括：

干细胞生长因子，即SCF；

白介素3，即IL-3；以及

促红细胞生成素，即EPO。

17.根据权利要求16所述的培养基，其中，

所述SCF的浓度为50-200ng/ml，优选50-100ng/ml；

所述IL-3的浓度为10-100ng/ml，优选20-50ng/ml；以及

所述EPO的浓度为1-10U/ml，优选5-10U/ml。

18.一种红系分化脱核培养基，其包括：

基础培养基；

生长因子；以及

孕酮受体和糖皮质受体的拮抗剂和/或抑制剂，其中，

所述生长因子包括促红细胞生成素，即EPO，所述孕酮受体和糖皮质受体的拮抗剂和/或抑制剂为选自下述化合物(I)～(IV)中的任一种或两种及以上：

19.根据权利要求18所述的培养基，其中，

所述生长因子还包括人铁转蛋白，

所述EPO的浓度为1-10U/ml，优选3-6U/ml，所述孕酮受体和糖皮质受体的拮抗剂和/或抑制剂的浓度为0.5-10μmol//ml，优选1-5μmol//ml。