[发明专利]一种提取动物组织线粒体的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种提取动物组织线粒体的方法。一种提取动物组织线粒体的方法，包括：a)将离体动物组织切成小块后在‑75～‑85℃下冷冻1.5～2h，得到冷冻组织块；b)将所述冷冻组织块解冻后切成厚度小于动物细胞直径的薄片；c)将所述薄片加入蒸馏水制成悬液，将所述悬液6000～6500rpm离心1～1.2h，得到上清液；d)将所述上清液12000～13000rpm离心1～1.2h后取沉淀，得到线粒体；其中，所述薄片的厚度大于动物线粒体的直径。本发明提取线粒体的方法将薄片进行两步离心，简单高效、步骤少，提取得到的线粒体数量大，提取过程中全程低温，提取到的线粒体活性高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种动物组织细胞膜的破碎方法和提取线粒体的方法。

背景技术

线粒体是动物组织细胞中重要的一种细胞器，存在于绝大多数活细胞中,它的主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。正因为此，研究线粒体内外膜、呼吸链酶及线粒体DNA等成分的结构、功能及理化性质已成为细胞生物学研究中的重要课题。另外，线粒体越来越多被作为系统功能性疾病治疗药物的靶点进行研究，如汪帅等人研究发现多种线粒体靶向药物可有效减轻心肌缺血再灌注损伤(实用心脑肺血管病杂志，2017，25(3))。提取有活性的线粒体是线粒体研究的基础。由于线粒体大量存在于代谢旺盛的细胞中，如动物的心肌、肝、肾等细胞，大量制备线粒体就是从这些组织细胞中提取。

目前，线粒体的提取方法很多,不同实验室根据实际情况往往采用不同的方法。选择线粒体提取方法的考虑因素主要有线粒体提取方法是否能减少提取过程中胞质的污染、提取得到的线粒体活性是否强、提取方法是否方便快捷等。常规的线粒体提取试剂盒方法成本高，提取的线粒体浓度不稳定、效率低、活率不高。蔗糖密度梯度离心法属于传统方法，该提取方法成本低，但是费时费力，而且需要超速低温离心机，仪器设备条件要求高。以上两种方法均需要先从动物组织中提取细胞，经过传代、扩增培养得到足够数量的细胞后才可以进行线粒体的提取，费时费力，并且提取的线粒体数量有限。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种提取动物组织线粒体的方法，用于解决现有提取动物组织线粒体方法费时费力、提取到的线粒体数量有限的问题。

本发明的具体技术方案如下：

一种提取动物组织线粒体的方法，包括：

a)将离体动物组织切成小块后在-75～-85℃下冷冻1.5～2h，得到冷冻组织块；

b)将所述冷冻组织块解冻后切成厚度小于动物细胞直径的薄片；

c)将所述薄片加入蒸馏水制成悬液，将所述悬液6000～6500rpm离心1～1.2h，得到上清液；

d)将所述上清液12000～13000rpm离心1～1.2h后取沉淀，得到线粒体；其中，所述薄片的厚度大于动物线粒体的直径。

优选的，所述离体动物组织的离体时间为0.5～1h。

优选的，所述冷冻组织块解冻后的温度为-15～20℃。

进一步的，所述步骤a)之前还包括：

将所述离体动物组织进行灭菌处理。

进一步的，将所述离体动物组织进行灭菌处理之前还包括：

将所述离体动物组织进行清洗。

进一步的，将所述薄片加入蒸馏水制成悬液之后，将所述悬液6000～6500rpm离心1～1.2h之前，还包括：

将所述悬液在4～8℃下放置12h。

进一步的，将所述悬液在4～8℃下放置12h之前还包括：

将所述悬液进行灭菌处理。