[发明专利]一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜及其制备方法

权利要求书

1.一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，包括人脐带间充质干细胞外泌体提取液和乳霜基础配方；

所述人脐带间充质干细胞外泌体提取液为P2~P5代人脐带间充质干细胞经饥饿培养后，用表皮细胞生长因子刺激后所得；

所述人脐带间充质干细胞外泌体提取液与乳霜基础配方质量比为（1:20）~（3:10）；

所述基础配方包括质量百分比如下的成分：

保湿剂12~15%

柔润剂7~12%

皮肤调理剂5-10%

乳化剂4~7%

防腐剂1~3%

PH调节剂0.5~1%

余量为水；

所述皮肤调理剂包括胶原蛋白、表皮细胞生长因子、透明质酸、维生素B3、阿魏酸中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，所述保湿剂包括甘油、甘氨酸、精氨酸、乳酸、丙二醇、丁二醇、山梨醇、透明质酸钠、海藻提取物、生育酚中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，所述柔润剂包括环己硅氧烷、角鲨烷、异十二烷、油醇油酸酯、油醇、胆甾醇、氢化椰油、氢化棕榈油、鲸蜡硬酸酯醇、鲸蜡醇乙基己酸脂、三羟甲基丙烷三异硬脂酸酯、二苯基甲硅烷氧基苯基聚三甲基硅氧烷中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，所述乳化剂包括硬脂醇、辛基十二醇、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-8二异硬脂酸酯、聚山梨醇酯-20、PEG-7橄榄油羧酸钠、月桂醇聚醚-7中的一种或几种；

根据权利要求1所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，所述防腐剂包括苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯、甲基氯异噻唑啉酮中的一种或几种；所述PH调节剂包括柠檬酸、柠檬酸钠、偏磷酸钠、碳酸钠、氢氧化钠中的一种或几种。

5.根据权利要求1-5任一项所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：配制DMEM/F12培养液，所述培养液含质量浓度20% FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；

S2：将脐带75%乙醇浸泡4min，PBS浸泡清洗3次，剔除血管后剪成1-2cm²小块，浸没于质量浓度0.1％的Ⅱ型胶原酶，37℃消化50-70分钟,加入0.25%胰酶，37℃消化10-20分钟，加入血清终止胰酶消化，将前述细胞组织液过滤，离心，弃去上层清液，取下层细胞；

S3：将S2得到的下层细胞加S1配制的DMEM/F12培养液进行细胞计数，达到10⁶~10⁷/ml后原代培养，按（1~5）×10⁶cells/ml接种到T25或T75细胞培养瓶，每个细胞培养瓶中DMEM/F12培养液体积为5~20 ml，置于CO₂体积比浓度5%的37℃培养箱中培养，3d后换液去除非贴壁细胞，以后每3~4d半量换液1次，细胞达80%融合时，用质量浓度0.25%胰酶于37℃下消化，以1×10⁴cells/ml传代扩增，取P2~P5代的人脐带间充质干细胞；

S4：将S3得到的P2~P5代的人脐带间充质干细胞置于O₂体积比浓度为 21％的37℃培养箱中，用DMEM/F12培养液进行培养，直到细胞达60～70％融合时，改用无血清的饥饿培养液，培养12-16h，将无血清的饥饿培养液换为含有10ng/ml表皮细胞生长因子的DMEM/F12培养液，培养至细胞处于对数生长期，收集细胞培养上清液300g~10000g梯度离心60-120min，将离心所得上清液用0.22um滤器过滤，得到人脐带间充质干细胞外泌体提取液；

S5：将S4得到的人脐带间充质干细胞外泌体提取液与乳霜基础配方按质量比（1:20）~（3:10）混合，得到人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜。

6.根据权利要求6所述的一种人脐带间充质干细胞外泌体外用乳霜，其特征在于，S2中所述细胞组织液过滤，为经100-200目筛网过筛，所述离心时间为10-20min，转速为1200rpm。