[发明专利]一种嘌呤类化合物修饰纳米金材料及其试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测红细胞的嘌呤类化合物修饰纳米金材料，制备方法和试剂盒。该材料以纳米金为主体，通过Au‑N键将嘌呤类化合物修饰于纳米金表面，其能够催化过氧化氢使指示剂3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺(TMB)变色。Fe²⁺会对纳米金体系的催化活性产生显著影响，通过TMB的紫外‑可见吸收光谱变化能够定量分析溶液中的Fe²⁺。Fe²⁺普遍存在于红细胞中，与卟啉环配位成为血红素的活性中心。因此，应用嘌呤衍生物修饰的纳米金体系可以实现对红细胞的分析，并可用于定量检测尿液中的红细胞，进而发展为一种尿潜血检测试剂盒。本发明设计的尿潜血检测试剂盒具有灵敏度较高，操作简便，反应迅速，稳定性好的优势。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测红细胞的嘌呤类化合物修饰纳米金材料，其制备方法，和基于该材料用于尿潜血检测的试剂盒。

背景技术

在日常生活中，尿潜血是通过尿常规检查出来的，尿常规中有一项红细胞。如果红细胞增多，以其数量来讲，少数就可以称为尿潜血。尿潜血是IGA肾病、肾炎的常见症状，也可能是肾囊肿或多囊肿破裂所为。尿潜血的原因一般归因于以下三项原因，一是炎症，一是结石，再则是肿瘤。关于炎症方面，如肾小球炎、膀胱炎等，除了可能会有血尿发生，尿液检查也会有潜血发生，结石本身不论是肾脏、输尿管或膀胱结石，都可能造成潜血，其他情境如生理期时，便秘也可能造成潜血。另外，肿瘤也会引起潜血，如肾、膀胱、输尿管的良性或恶性肿瘤。因此，检测尿潜血对潜在疾病的发现和及时治疗有重要的意义。

纳米金是一类能够模拟天然过氧化氢酶(HRP)的无机纳米材料，天然的HRP不易提取、存储，同时在强酸碱和高温条件下极易失活。而纳米级别的金溶胶能够克服这些缺陷，可在严苛的条件下依然保持较高的活性，催化过氧化氢使有机指示剂3,3‘,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)变色。红细胞可加快反应，产生更深的颜色变化。同时，体系的吸光度同红细胞浓度呈现良好的线性相关。因此，该发明可用于间接检测尿液中红细胞浓度。

发明内容

本发明的目的是一种用于检测红细胞的嘌呤类化合物修饰纳米金材料，其制备方法，和基于该材料用于尿潜血检测的试剂盒。

一种用于检测红细胞的嘌呤类化合物修饰纳米金材料，以纳米金为主体，通过Au-N键将嘌呤类化合物修饰于纳米金表面。

优选的，所述嘌呤类化合物是2,6-二氨基嘌呤、6-巯基嘌呤、腺嘌呤、嘌呤或6-肼基嘌呤中的任意一种。

一种用于检测红细胞的嘌呤类化合物修饰纳米金材料的制备方法，在冰水浴条件下，按顺序向嘌呤类化合物水溶液中加入吐温80、氯金酸和硼氢化钠进行反应。

优选的，所述嘌呤类化合物同氯金酸摩尔比例在2:1-50:1，硼氢化钠用量同氯金酸质量比在1:10-5:1，吐温80加入量同总溶液的体积比在1:100-1:10。

优选的，所述嘌呤类化合物是2,6-二氨基嘌呤、6-巯基嘌呤、腺嘌呤、嘌呤或6-肼基嘌呤中的任意一种。

一种试剂盒，使用上述用于检测红细胞的嘌呤类化合物修饰纳米金材料，用于检测尿潜血。

优选的，所述试剂盒中包括：第一玻璃管，含有上述用于检测红细胞的嘌呤类化合物修饰纳米金材料和HAc-NaAc缓冲液的混合液；第二玻璃管，含有H₂O₂和TMB溶液的混合液；加入尿液样品后，折断玻璃管进行检测反应。HAc-NaAc缓冲液的pH值范围为2.0-3.2，用于检测红细胞的嘌呤类化合物修饰纳米金材料和HAc-NaAc缓冲液的体积比为1:1.5-1:4.5，H₂O₂和TMB溶液的体积比为0.75-1.5:1，H₂O₂浓度范围为0.1-1mol/L，TMB溶液浓度范围为10-50mM。