[发明专利]一种用于测定谷草转氨酶的稳定试剂

说明书

本发明提供了一种用于测定谷草转氨酶的稳定试剂。本公开的试剂是双试剂，包含TRIS、NADH、LDH、MDH、EDTA、TritonX‑100、BSA、Proclin。本公开的试剂有效改善NADH指示系统体外诊断试剂的热稳定性、机载稳定性、运输稳定性，可有效延长试剂盒的保存时间。

技术领域

本申请涉及生物化学和临床检验领域。更具体而言，本申请涉及一种用于测定谷草转氨酶的试剂。

背景技术

肝内的谷草转氨酶(AST)有2种同工酶，分别存在于肝细胞的线粒体(mAST)和胞浆内(sAST)。在肝细胞轻度病变时，仅sAST释放入血；而当病变严重时，mAST也会相继释放入血。故血清AST活性随肝细胞损害的程度增高。

在HBV感染的肝炎和肝病时，AST随ALT较小幅度升高，或虽幅度较大而时间短暂，可能主要是sAST，临床意义与ALT相同；AST增高超过ALT，虽幅度并不太大而持续时间很长，可能主要是mAST，提示病变的慢性化和进展性。

目前，体外测定AST的方法主要采用连续监测法，该方法是国际临床化学和实验室医学联盟IFCC的推荐方法。具体测定过程如下：

谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与MDH催化的反应偶联，使NADH氧化成NAD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与样本中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性(于洋，中国卫生标准管理，2014年)。

CN106282312A公开了一种用于同时检测谷草转氨酶和谷丙转氨酶的干化学二联试剂条。在试剂条的反应膜上吸附有相应的反应物，当在进样孔加入被检测物后，通过表面扩散膜，使得被检测物均匀分散到两片试纸垫上，最终到达底层反应膜进行反应。该检测方法采用了干化学分析技术。干化学是相对于湿化学技术而言的，是指将液体检测样品直接加到为不同项目特定生产的商业化的干燥试剂条上，以被测样品的水分作为溶剂引起特定的化学反应，从而进行化学分析的方法。干化学以酶法为基础的一类分析方法，又有干试剂化学或固相化学之称。干化学分析技术优点在于：无须贮备任何其它试剂或配制任何溶液；产品是干燥的，因此比湿化学的试剂更易于保存。在目前临床机构中，检测样本量非常巨大。因而，检测都是在大型设备比如生化分析仪上进行的。然而，上述干化学分析试纸条不兼容生化分析仪。因此，本领域中仍然需要一种AST的稳定液体检测试剂。

CN106644976A公开了一种天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒。试剂盒包括试剂1和试剂2：其中试剂1的组分包括：Tris-HCl缓冲液、L-天门冬氨酸、还原型辅酶、苹果酸脱氢酶、酶保护剂、稳定剂、防腐剂；试剂2的组分包括：Tris-HCl缓冲液、α-酮戊二酸、稳定剂、防腐剂。其中，酶保护剂选自牛血清白蛋白、甘油、糖类中的一种或多种，其用量为0.5％-1.5％BSA、10％-15％甘油；糖类可选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖中的一种或多种，其用量为5g/L-10g/L。

对于诊断试剂的稳定性研究，本领域常采用加速稳定性实验来预测产品的失效期(用于评价货架稳定性，有时也被称作长期稳定性或者有效期)。这样的方法优点在于研究周期短(通常数周即可)，不用真正地将试剂存放1年、2年、甚至更长的时间。但是，加速稳定性的理论基础是阿伦尼乌斯公式(Arrhenius equation)。为了确保预测的准确性，要想适用该公式，则对试剂有着较多的要求。这是一种理想状态下的预测。然而，生化试剂的成分复杂、种类繁多，并不是任何试剂都能完美地适用加速稳定性实验来预测其真正效期。