[发明专利]一种人粪便样本中脱落细胞DNA的提取试剂盒及提取方法

说明书

本发明提供了一种人粪便样本中脱落细胞DNA的提取试剂盒，其特征在于，包括如下试剂：1）样本保存液SPB；2）细胞捕获剂CCB；3）细胞裂解液I；4）DNA提取液I；5）DNA溶解液EB；6）无水乙醇和75%乙醇。本发明还提供了使用试剂盒用于人粪便样本中脱落细胞DNA的提取方法。本发明有以下优势和应用价值：1.样本采样简便、无创、个性便捷，无需专人协助取样，可自行取样；粪便样本取样简单（无需取粪便样本硬性要求的特定位置，随机取成型的粪便样本即可），取人者可自行取样，无需到医院由专业人士协助取样，便捷、非侵入、取样者体验友好。2.样本保存方便：常温放置即可；3.样本预处理简单：无需做离心淘洗法、密度梯度离心法、及免疫磁珠法等处理。

技术领域

本发明涉及医学生物领域中核酸(DNA)的提取方法，具体涉及从人类粪便中提取脱落细胞DNA的方法及应用。

背景技术

粪便是食物经口咀嚼，经食道到达胃后，通过胃的消化，进入十二指肠，同时在胆汁与胰液的共同作用下，经小肠消化和吸收后，最终大肠中形成的残渣排泄物。粪便是保持机体内环境稳定的最终代谢产物，除了含有水、蛋白质、无机物、脂肪、未消化的食物纤维外，还含有细菌细胞、病毒及器官的表皮脱落细胞等。粪便中的细菌主要来源于肠道菌群或者少量来源于食物；器官的表皮脱落细胞主要来源于大肠。粪便中不但蕴藏着丰富的生物学信息，且具有非侵入性、无创、采样便捷、来源广泛等优点。粪便的成分及含量的改变不仅受消化系统的影响，而且与血液循环、代谢、呼吸等系统的生理或病理变化有关。从粪便样本中分离出总核酸，并对这些核酸序列进行分子检测(电泳分析、Q-PCR、Sanger及NGS等技术)，可以帮助对肿瘤、肠道微生物、艾滋病、疟疾等潜在的重大疾病的早期、无创的分子检测。

由于粪便中的脱落细胞含量很低，采用常规的核酸提取方法难以从粪便脱落细胞中获取足量且高质量的核酸。粪便的放置条件、放置的时间等条件都会影响粪便样本中脱落细胞的完整性，进而影响提取核酸时的回收率。为了从粪便中以高回收率获取高质量的核酸，通过采用样本保存液常温保存样本和脱落细胞浓缩捕获方法，从而简化样本采样和保存流程、缩短样本预处理时间，非常方便实际科研和生产的应用。

在采用离心柱法提取核酸时，通常将样品离心通过吸附柱，使样品中的核酸在高盐条件下结合到吸附柱的硅胶模上。然而这样的上样方法对于核酸含量低、样品量较大的粪便样本液而言，不但需要大量的提取试剂，而且上量离心时间过长，不利于核酸的提取。鉴于此难题，尽管近年来许多研究提出相应解决的方法如：离心淘洗法、密度梯度离心以及免疫磁珠法，但这些研究方法具有对粪便取样要求苛刻、粪便样本保存要求高、对耗材和设备要求高、操作流程繁琐而耗时等的缺陷，另外市面上已有一些粪便DNA提取试剂盒不但不能完全解决这些难题，而且最终提取DNA的实际质量并不能达到官方公开的指标，另外价格也比较昂贵，难以实现在分子检测的应用。因此针对粪便中核酸含量低、提取核酸时所需样本量较大的情况下，发明一种从粪便中快速富集并提取核酸的方法，将对临床粪便样本进行无创的分子检测具有重要的应用价值。本发明提供了粪便样本保存液和脱落细胞富集捕获的简易方法，可将大量的粪便样本浓缩处理后，快速富集至核酸吸附柱上，再经洗涤、洗脱步骤提取出高质量的核酸，可用于分子检测。

发明内容

本发明针对上述现有技术所存在不足之处开展的实验研究，目的在于提供一种快速简易、低成本、稳定性和重复性高的从粪便中提取人基因组DNA试剂盒及提取的方法。

本发明的人类粪便DNA提取方法，其实质是自粪便中提取排便人的肠道上皮脱落细胞的DNA，所要解决的技术是不仅能使DNA完整从细胞中释放出来，并且保证在常规一系列的分离、沉淀和纯化技术过程中不被破坏，从而得到浓度和纯度较高的人基因组DNA样本。

本发明的粪便脱落细胞提取试剂盒，包括如下试剂：1)样本保存液SPB；2)细胞捕获剂CCB；3)细胞裂解液I；4)DNA提取液I；5)DNA溶解液EB；6)无水乙醇和75％乙醇。