[发明专利]一种白花蛇舌草的组织培养方法

权利要求书

1.一种白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)组织培养方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：

(1)无菌材料的获得及诱导培养：切取长势良好、无病虫害的白花蛇舌草的腋芽，用自来水冲洗30～60min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇2～5min，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用混合消毒液浸泡10～20min，再用无菌水冲洗3～5遍；在灭菌的滤纸上吸干水分，然后将腋芽接种到装丛生芽诱导培养基的培养瓶中，盖上瓶盖并用封口膜封住瓶口，置于培养箱中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养15～25天；所述混合消毒液为体积比1：200的吐温20和84消毒液的混合液；所述丛生芽诱导培养基为添加6-BA 0.5～2.0mg/L、2，4-D0.5～1.5mg/L、NAA0.05～0.5mg/L和酸水解酪蛋白0.2～0.6g/L的MS基本培养基；

(2)芽的增殖：观察步骤(1)所述24～26℃，光照1500～2500lx条件下培养5～15天后，腋芽切口部位出现绿色突起，20～40天后出现丛生芽，再培养10～20天，当丛生芽长到2～4cm时，将丛生芽切下转接到芽增殖培养基中，在24～26℃，光照1500～2500lx条件下进行增殖培养，获得丛生苗；所述芽增殖培养基为添加6-BA 0.5～2.0mg/L、2，4-D 0.5～1.5mg/L、NAA 0.05～0.2mg/L、酸水解酪蛋白0.2～0.6g/L和脯氨酸200～600mg/L的MS基本培养基；

(3)生根培养：将分化的丛生苗从基部切下，插入生根培养基中培养至芽生根，所述的生根培养基为改良的1/2MS培养基中加入0.05mg/L～0.15mg/L的NAA,0.2～0.5g/L的酸水解酪蛋白；所述生根培养的改良的1/2MS培养基是指将大量元素、微量元素和铁盐的含量均降低为1/2的含量，不添加有机物，即终浓度组成为：NH₄NO₃ 0.83克、KNO₃0.95克、CaCl₂·2H₂O 0.22克、MgSO₄·7H₂O 0.19克、KH₂PO₄ 0.09克、KI 0.42毫克、H₃BO₃ 3.1毫克、MnSO₄·4H₂O 11.2毫克、ZnSO₄·7H₂O 4.3毫克、Na₂MoO₄·2H₂O 0.13毫克、CuSO₄·5H₂O 0.013毫克、CoCl₂·6H₂O 0.013毫克、Na₂EDTA 18.7毫克、FeSO₄·7H₂O 13.9毫克、蔗糖30克/升、琼脂粉9克/升，溶剂为水，pH为5.6～6.0；

(4)生根苗移栽：待小苗叶片舒展，叶色浓绿，苗高3-5cm时，打开瓶盖炼苗2～4天后，将小苗植株上的琼脂和杂物洗净，移栽至消毒后的育苗基质上，浇透水，盖上薄膜，保持湿度80％以上，置通风阴凉处，在24～26℃、光照1500～2500lx条件下培养8～12d；所述育苗基质为细沙、腐殖土与谷糠灰按照质量比5：3：2的比例配制而成，所述育苗基质的消毒方法为：采用体积浓度0.5％福尔马林水溶液均匀喷洒基质，塑料薄膜覆盖3～5天后揭开薄膜再曝晒基质1～3天，完成对育苗基质的消毒，或者采用体积浓度0.5％福尔马林水溶液均匀喷洒基质，塑料薄膜覆盖3～5天后揭开薄膜再在60℃下干燥2天，完成对育苗基质的消毒。

2.如权利要求1所述白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)组织培养方法，其特征在于步骤(1)所述丛生芽诱导培养基为添加6-BA 1.0mg/L、2，4-D 1.0mg/L、NAA 0.2mg/L和酸水解酪蛋白0.4g/L的MS基本培养基。