[发明专利]一种动物源性食品中多种糖肽类抗生素的同时检测方法

说明书

本发明公开了一种动物源性食品中多种糖肽类抗生素的同时检测方法，主要包括将样品经过溶液萃取、用HLB固相萃取柱和强阳离子(MCX)固相萃取柱串联净化富集，经反相色谱柱进行分离后采用超高效液相色谱串联质谱联用仪在多反应监测模式下进行检测，然后进行定性和定量分析。本发明可以对牛奶，鸡蛋、鸡肉等样品动物源性食品中的特拉万星、替考拉宁、奥利万星、达巴万星和万古霉素五种糖肽类抗生素同时检测。本发明的检测方法灵敏准确快速，仪器上的分析时间仅需六分钟就可同时五糖肽类抗生素进行定性和定量分析。而且本发明的检测方法对其他糖肽类抗生素的检测也具有一定的参考价值。

技术领域

本发明属于抗生素的检测领域，尤其涉及一种动物源性食品中多种糖肽类抗生素的同时检测方法。

背景技术

我国是抗生素的生产和使用大国，临床上抗生素的不合理使用，水环境中抗生素污染和食品中抗生素的残留导致许多致病菌产生了耐药性。耐药菌的增加一方面造成常用抗生素的进一步滥用，另一方面也从临床上对抗生素产品提出了更高的要求。由于青霉素和头孢菌素类抗生素的上市使用，糖肽类抗生素作为保留药物，在临床上通常被用作经β-内酰胺内抗生素或其他抗菌药物治疗失败后才使用的最后手段；被认为是抗菌药物的最后一道防线，成为顽固性耐药细菌感染危重病人的救命药物。但是随着糖肽类抗生素的广泛使用，已经出现了糖肽类抗生素耐药的金黄色葡萄球菌种，使人类的生命健康又受到了严重的威胁。寻找新型抗生素来攻克耐药细菌的任务变得十分紧迫，但合理使用抗生素、避免临床滥用和被动暴露仍是杀灭感染，控制疾病的最根本途径。

食品中抗生素的分离与检测将为流行病学评价特定人群对其暴露程度提供理论和数据依据。尽管分析测试平台在分离技术，高灵敏度、高分辨率的新型质谱仪及后期高通量组学数据处理都有了长足的发展,然而准确测定各种复杂介质中痕量抗生素对样品的前处理和检测方法都提出了很高的要求。固相萃取由于具有较高的富集因子、较少的试剂消耗、易于实现自动化及无相分离操作等优点，已成为最为常用的样品前处理方法。如何选择高效的样品前处理方法已越来越成为其分析鉴定的关键步骤。近年来，国内外有不少对糖肽类抗生素的高效液相色谱质谱检测的研究。但是，大部分的研究只限于对某一种，特别是替考拉宁的检测，而且针对的是体液(血液)样品，针对动物源性食品猪肉，也只有万古霉素，去甲万古霉素和替考拉宁的检测。对动物源性食品中万古霉素，替考拉宁，特拉万星，达巴万星，奥利万星的同时检测研究，目前并没有报道过。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种动物源性食品中多种糖肽类抗生素的同时检测方法。

一种动物源性食品中多种糖肽类抗生素的同时检测方法，主要包括以下步骤：

(1)对动物源性食品样品进行液相萃取；

(2)对步骤(1)得到的提取液进行富集净化：采用HLB和MCX固相萃取柱串联净化富集，经洗脱后，将洗脱液吹干，复溶于0.2％甲酸水溶液中；

(3)将步骤(2)所得溶液经反相色谱柱在柱温为在40℃、流速为0.3mL/min，采用0.1％甲酸水与甲醇进行梯度洗脱；再采用超高效液相色谱串联质谱联用仪多反应监测模式下在优化的色谱和质谱分析条件下进行检测；

(4)定性和定量分析：用样品溶液中出现的色谱峰保留时间和母离子/子离子对进行定性分析；制作多种糖肽类抗生素的标准曲线，用外标法分别对样品溶液中多种糖肽类抗生素的含量进行定量计算。

进一步的，所述多种糖肽类抗生素包括特拉万星、替考拉宁、奥利万星、达巴万星、万古霉素中的一种或者多种。

进一步的，步骤(1)中对样品进行液相萃取主要包括：称取动物源性食品样品置于离心管中，加入0.1mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液旋涡混合，于振荡器上提取15min，再加入甲醇沉淀蛋白10min,在用冷冻离心机在温度低于5℃的条件下离心5min，取上清液，用快速滤纸过滤。温度低于5℃使蛋白沉淀更完全、更有效。