[发明专利]特异性表达PD-1的干细胞、其鉴定和分离方法及用途

权利要求书

1.一种干细胞，其特征在于：所述干细胞特异性表达程序性死亡受体PD-1，其中所述干细胞为最初不表达PD-1但经CRISPR修饰后表达PD-1的间充质干细胞。

2.如权利要求1所述的干细胞，其中所述间充质干细胞是CRISPR修饰的PD-1⁺骨髓间充质干细胞。

3.一种制备CRISPR修饰的PD-1⁺间充质干细胞的方法，其中所述间充质干细胞最初不表达PD-1，所述方法包括：

在间充质干细胞中筛选合适的PD-1基因靶序列，得到靶向序列5'-CGACTGGCCAGGGCGCCTGTGGG-3'；

设计sgRNA序列；

构建sgRNA表达载体；

将dCas9和sgRNA表达载体导入到目的细胞中；以及

通过实验验证所述目的细胞是否表达PD-1。

4.如权利要求3所述的方法，其中最初不表达PD-1的所述间充质干细胞是任何组织来源的不表达PD -1的间充质干细胞。

5.根据权利要求3所述的方法，其中最初不表达PD-1的所述间充质干细胞是骨髓间充质干细胞。

6.一种特异性表达程序性死亡受体PD-1的干细胞，其中所述干细胞根据权利要求3-5任一项所述的方法获得。

7.根据权利要求1或2所述的干细胞在制备用于组织再生、或缓解或治疗疼痛、或治疗免疫相关性疾病或炎症性疾病或代谢性和退行性疾病或部分恶性肿瘤或真菌感染的药物中的用途；

其中，所述免疫相关性疾病为全身和局部的自身免疫性疾病；所述自身免疫性疾病选自系统性红斑狼疮，硬皮病，系统性硬化症，重症肌无力，I、II、III和IV型超敏反应，肝炎后肝纤维化，炎性肠病，肾小球肾炎，皮肌炎，原发性血小板减少性紫癜，自身免疫性溶血性贫血，再生障碍性贫血造血干细胞移植后的移植物抗宿主病；

所述部分恶性肿瘤选自恶性浆细胞病、何杰金淋巴瘤与非何杰金淋巴瘤、急慢性淋巴细胞白血病。

8.根据权利要求7所述的用途，其中所述组织再生选自牙髓再生、牙龈再生、骨再生、软骨再生、皮肤和黏膜再生、血管再生、肌肉和肌腱再生、角膜再生、视网膜再生、外周神经元再生、中枢神经元再生、胰岛再生、脂肪再生；所述疼痛选自痛经、神经血管性头痛、关节痛、消化系统平滑肌痉挛所引起的腹痛；所述炎症性疾病选自各种原因导致的关节炎、实质器官炎症、甲状腺炎症、结肠炎、黏膜炎、牙周炎、牙龈炎、克罗恩病，其中所述各种原因导致的关节炎选自风湿性关节炎、类风湿关节炎、痛风性关节炎、损伤性关节炎及关节退行性变，所述实质器官炎症选自病毒性肝炎或酒精导致的肝炎、脂肪肝、肺炎、微生物感染或吸入不可降解异物导致的肺纤维化、蜂窝织炎、皮下脓肿，所述甲状腺炎症为桥本甲状腺炎；所述代谢性和退行性疾病选自动脉粥样硬化和狭窄导致的心脑血管系统疾病、I型和II型糖尿病、痛风、帕金森综合征、阿尔茨海默病；所述真菌感染选自全身或局部的白色念珠菌感染、霉菌感染、隐球菌感染。

9.根据权利要求1或2所述的干细胞在制备用于治疗慢性疼痛或用于组织再生的药物中的用途，其中所述组织再生为神经再生。

10.一种组合物，其中所述组合物包括根据权利要求1或2所述的干细胞或者根据权利要求6所述的干细胞。

11.根据权利要求10所述的组合物，还包括药学上可接受的载体。

12.一种试剂盒，其中所述试剂盒包括根据权利要求1或2所述的干细胞或者根据权利要求6所述的干细胞、或者根据权利要求10或11所述的组合物。