[发明专利]一种检测黄曲霉毒素B1的胶体金试纸条

说明书

本发明黄曲霉毒素B1的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及动物源食品兽药残留检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含黄曲霉毒素B1单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有黄曲霉毒素B1蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测黄曲霉毒素B1，方便、快捷、结果准确。

技术领域

本发明涉及谷物食品中农药残留检测技术领域，特别是涉及黄曲霉毒素B1的免疫胶体金检测卡及其制备方法。

背景技术

黄曲霉毒素（Aflatoxins，AFT）是真菌的次级代谢产物，主要是由黄曲霉（A.flavus）、寄生曲霉（A. parasiticus）和集蜂曲霉（A. nonius）一些菌株产生的；黄曲霉的产毒能力由于菌株的不同而差异甚大；寄生曲霉的所有菌株都能产生黄曲霉毒素。黄曲霉毒素是一种毒性很强的肝毒素，可引起肝脏的急性或慢性损害，它与乙肝病毒被认为是肝癌的最主要的两大诱因；除损害机体的肝脏以外，黄曲霉毒素对肾脏等其他多种组织器官也能造成严重损害，更为严重的是黄曲霉毒素已被证实具有致癌、致畸、致细胞突变的“三致”作用。黄曲霉毒素广泛存在于花生、玉米、麦类、稻谷等谷物农产品中，在通心粉、调味品、牛奶和食用油等食品中也经常发现，严重危害人、畜、禽类健康。黄曲霉毒素 B1 被公认为是目前致癌力最强的天然物质，1993 年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物。自从 1961 年发现黄曲霉毒素以来，黄曲霉毒素的种类越来越多。目前已分离鉴定出十二种，分别是黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、M1、M2、B2a、G2a、GM1、R0 和毒醇；从化学结构上看，各种黄曲霉毒素的结构非常相似，都含有一个双呋喃环和氧杂萘邻酮（香豆素），前者为基本毒性结构，后者可能与致癌有关。黄曲霉毒素的毒性比氰化物和砒霜大很多倍。目前已查明，黄曲霉毒素对人和很多种动物都表现出剧烈的毒性，而且具有明显的致癌能力；其中黄曲霉毒素 B1 毒性最大，致癌能力最强，G1、M1 其次，B2、G2 和 M2 较弱。黄曲霉毒素 B1 除致癌外，还能引起突变和导致畸形。黄曲霉毒素 B1 的LD 50 为0.249 mg/kg, 小于 1 mg/kg，属特剧毒物质，其毒性为氰化钾的 10倍、为砒霜的 68 倍。人们发现，黄曲霉毒素 B1 是目前所有已知致癌物中致癌力最强的一种。

关于黄曲霉毒素的检测方法已经出现了许多的化学检测方法，如气相色

谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、薄层层析法、分光光度法、液质联用仪（LC-MS）、气质联用仪（GC-MS）等。化学检测方法存在测试成本高、分析时间长、检测所需样品量大（通常>500 mL）及前处理步骤繁琐等不足，无法在较大范围内系统、全面、快速分析黄曲霉毒素的含量。所以，建立一种简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业进行现场检测且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。

发明内容

针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种黄曲霉毒素B1的免疫胶体金检测卡及其制备方法，可有效解决能快速、简便地检测出黄曲霉毒素B1的问题。

本发明的黄曲霉毒素B1胶体金检测卡，包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了黄曲霉毒素B1-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC胶板和塑料模具组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。

本发明的黄曲霉毒素B1胶体金检测卡的制备方法，是由以下步骤实现：