[发明专利]6-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.6-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针，特征在于，化学式如式Ｉ所示：

（Ｉ）；

式中，R为甲基、乙基、丙基、丁基和戊基中的任一种;；

该荧光探针能够检测区分肿瘤细胞中的活细胞、细胞膜完整的死细胞、细胞膜破裂的死细胞及细胞碎片；

对于活细胞染色结果为，细胞核没有荧光，细胞质特异性的荧光染色；对于细胞膜完整的死细胞，表现为全细胞荧光分布；对于细胞膜破裂的死细胞及细胞碎片，表现为无荧光染色。

2.一种权利要求1所述的6-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针的制备方法，特征在于，步骤如下：称取丹磺酰氯溶解于吡啶，称取6-氨基-吲哚溶解于吡啶，缓慢滴入丹磺酰氯溶液，冰浴下搅拌2小时至室温，氩气保护，反应过夜；向反应中加入双蒸水终止反应，且沉淀反应混合物；采用乙酸乙酯溶解析出的固体，分别用碳酸氢钠洗涤两次，饱和氯化钠洗两次，水洗两次；加入硫酸钠去除水，经过柱层析得到中间体1；将中间体1与氢化钠溶解于溶剂二甲基甲酰胺中，氩气保护下冰浴反应30分钟；逐滴加入各种烷基化试剂，室温反应过夜；向反应体系中加入二氯甲烷至反应物完全溶解，加入饱和氯化钠洗三次，水洗两次，加入硫酸钠除水，反应混合物通过柱层析进行分离纯化。

3.一种权利要求1所述的6-丹磺酰胺-吲哚类荧光探针进行检测区分活的或死的肿瘤细胞的方法，特征在于：首先，向需要检测的细胞样品中加入50微摩尔/升的荧光染料共同孵育10分钟；其次，进行没有结合染料的洗脱，由于培养的肿瘤细胞附着在培养板上，通过洗脱漂洗掉未结合的染料；最后，用荧光显微镜，对于荧光染料采用紫外光激发，对肿瘤细胞进行直接的观察；对于活细胞染色结果为：细胞核没有荧光，细胞质特异性的荧光染色；对于细胞膜完整的死细胞，表现为全细胞荧光分布；对于细胞膜破裂的死细胞及细胞碎片，表现为无荧光染色。