[发明专利]用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒及将使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱再生的方法

说明书

本发明公开了用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒及将使用过的葡聚糖凝胶脱盐柱再生的方法。该试剂盒包括：清洗液；以及保存液，其中，所述清洗液包含：9‑11mM的PBS缓冲液；3‑6mol/L的尿素；以及0.05‑0.1质量％的去垢剂，所述保存液包含：9‑11mM的PBS缓冲液；以及0.05‑0.1质量％的叠氮化钠。利用该试剂盒进行葡聚糖凝胶脱盐柱再生，能够完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体而言，涉及葡聚糖凝胶脱盐柱再生方法。

背景技术

蛋白的分离纯化是现代分子生物学的重要组成部分，是其下游各种实验过程，如酶联免疫、免疫荧光、免疫比浊、免疫组化、Western等的起点。蛋白质量的好坏直接决定了后续实验的成败。蛋白分离纯化方法之一是葡聚糖凝胶柱层析法，其原理是利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而最后流出柱外，因此能将不同分子大小的物质分离开。

然而，该分离方法的一个突出缺点在于脱盐柱中的小分子荧光素和蛋白质难以完全洗脱，残留的杂质为重复利用带来污染，所以商品化的脱盐柱都是一次性的，并且价格较昂贵，使用成本较高。此外，废弃的纯化柱还会对环境造成污染，具有潜在的危害性。

因而，发明一种可以完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力的方法，具有重大意义。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种可以完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力的方法。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现和工作而完成的：

发明人发现，目前，虽然已有葡聚糖凝胶脱盐柱再生方法的报道，但是其再生过程都使用到强酸、强碱或乙醇，强酸和强碱会破坏葡聚糖凝胶的结构，乙醇会使葡聚糖凝胶缩水产生气泡。并且，常规的再生方法无法避免地对脱盐柱造成损坏，影响脱盐柱的性能。

因而，发明人进行了一系列科学的理论探索和实验验证。最终，发明人惊喜地发现了一种可以完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力的试剂组合——包括清洗液和保存液。进而，在此基础上，发明人还对利用上述清洗液和保存液进行再生葡聚糖凝胶脱盐柱的方法进行了探索和优化，并最终获得了一种操作简单、实用性强，能够有效除去脱盐柱中残留的荧光素、蛋白质和其他杂质的葡聚糖凝胶脱盐柱再生方法。

进而，在本发明的第一方面，本发明提供了一种用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒包括：清洗液；以及保存液，其中，所述清洗液包含：9-11mM的PBS缓冲液；3-6mol/L的尿素；以及0.05-0.1质量％的去垢剂，所述保存液包含：9-11mM的PBS缓冲液；以及0.05-0.1质量％的叠氮化钠。根据本发明的实施例，利用本发明的试剂盒进行葡聚糖凝胶脱盐柱再生，能够完全去除葡聚糖凝胶脱盐柱残留杂质且不影响其再分离蛋白能力。并且，获得的再生脱盐柱至少可以重复利用8次。

需要说明的是，本发明对于去垢剂的种类不作严格限定，只要能够有效实现去垢功能、去除目标杂质即可。根据本发明的实施例，所述去垢剂为选自Triton X-100、NP-40和SDS中的至少之一。由此，根据本发明实施例的试剂盒用于葡聚糖凝胶脱盐柱再生时，对脱盐柱中残留的荧光素、蛋白质和其他杂质去除效果好，且不影响脱盐柱的再分离蛋白能力。

根据本发明的实施例，所述清洗液和所述保存液分开放置。