[发明专利]一种检测茶叶中氟虫腈的化学发光免疫检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测氟虫腈的化学发光免疫检测试剂盒，属于免疫学检测领域。本发明的试剂盒由包被有氟虫腈‑载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板、氟虫腈标准品、氟虫腈‑过氧化物酶标记抗体工作液、发光底物液、浓缩样品稀释液、浓缩洗涤液组成。所述氟虫腈‑载体蛋白偶联物是将氟虫腈与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，浓缩洗涤液含有0.05%吐温‑20。与传统的酶联免疫吸附分析法比较，本发明的试剂盒具有更高的灵敏度，且检测时间短、费用低，可用于茶叶样品中氟虫腈的残留量检测。

技术领域

本发明涉及一种检测氟虫腈的化学发光免疫检测试剂盒，用于检测动物源性食品中如茶叶中的氟虫腈含量或残留量。属于免疫学检测领域。

背景技术

氟虫腈英文通用名为Fipronil（氟虫腈），商品名Regent（锐劲特），是一种苯基吡唑类广谱杀虫剂，可杀灭跳蚤、螨、虱、蚜虫、叶蝉、蝇类和鞘翅目等害虫。主要用于防治蔬菜、水稻、烟草、棉花、畜牧业、公共卫生、贮存用品及地面中各类别的作物害虫以及卫生害虫。

由于氟虫腈对蜜蜂、水生生物毒性很大，对环境不友好，很多国家都禁止该药物的使用。世界卫生组织(WHO)称持续时间大量进食高浓度氟虫腈会损害肝脏、甲状腺和肾脏，它被列为“对人类有中度毒性”的化学品。对整个欧洲的蛋鸡养殖产业形成严重打击，“毒鸡蛋”风波据估计已造成相关行业上亿欧元的经济损失。

农业部第1157号公告：“自2009年10月1日起，除卫生用、玉米等部分旱田种子包衣剂外，在我国境内停止销售和使用用于其他方面的含氟虫腈成分的农药制剂。农业部第2583号公告：禁止非泼罗尼及相关制剂(即氟虫腈)用于食品动物。农业部近日连发两个通知，要求切实加强农药使用指导和市场监管，加强蛋禽养殖质量安全管理，严禁将氟虫腈作为兽药经营和使用，重点针对氟虫腈违法违规使用问题开展大检查，严防其在生产经营各环节对饲料原料和产品造成污染。GB2763-2016中明确了氟虫腈在谷物、油料和油脂、蔬菜、水果、糖类和食用菌中的限量。玉米及鲜食玉米为0.1mg/kg，其他为0.02mg/kg。2017年5月5日，台中市抽验休闲小站一款“红茶”检出氟虫腈0.003ppm，超过标准的0.002ppm。世界卫生组织(WHO)指，大量进食高浓度氟虫腈一段时间，会损害肝脏、甲状腺和肾脏。

由于氟虫腈具有毒性大，致癌性强等特点。这就要求检测方法灵敏度高，特异性强，集分离与检测为一体，目前氟虫腈的测定方法主要为高效液相色谱法（HPLC）。

化学发光免疫检测技术是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光检测技术的高灵敏性和免疫分析技术的高特异性。本发明通过特有的免疫动物制备具有高亲和力、高特异性的氟虫腈抗体，并采用酶标记抗体，建立一种可以检测氟虫腈的化学发光免疫试剂盒，将为茶叶产品中氟虫腈药物留检测提供新方法，对保证畜产品安全提供重要的理论和实践依据，维护畜牧业健康发展具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现的。化学发光免疫分析是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中氟虫腈含量越高，反应体系中发光强度越弱；反之，样品中氟虫腈含量越少，发光强度越高。

本发明是一种检测氟虫腈的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于含有以下成份：

1、包被有氟虫腈-载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板；所述氟虫腈-载体蛋白偶联物是将氟虫腈与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，所述载体蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、鸡蛋白蛋白、鼠血清蛋白或兔血清蛋白；

2、氟虫腈标准品；

3、氟虫腈-过氧化物酶标记抗体：该成分为用过氧化物酶标记的氟虫腈抗体，所述氟虫腈抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；