[发明专利]镇痛活性肽DKK突变体及其衍生物的制备与应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，涉及镇痛活性肽DKK突变体及其与应用，具体涉及利用基因工程技术获得镇痛活性肽DKK突变体及其衍生物、类似物、活性片段的方法和在制备镇痛药物域中的应用。所述的镇痛活性肽DKK突变体序列如SEQ ID No.2‑11所示。所述的镇痛活性肽DKK突变体及其活性片段或类似物可以与药学上可接受的载体混合制备临床上可接受的注射剂、口服制剂、透皮吸收制剂、粘膜吸收制剂等用于各类痛症。本发明所述的镇痛活性肽DKK突变体具有较好的镇痛活性，其获得方法常规、简单、产量高。

技术领域：

本发明涉及生物医药技术领域，涉及镇痛活性肽DKK突变体及其衍生物的制备与应用，具体地说，本发明涉及镇痛活性肽DKK十个突变体及其衍生物、类似物、活性片段的结构及其制备方法，以及作为镇痛药物在医药领域中的应用。

背景技术：

疼痛是人类共有而又有较大个体差异性的一种不愉快的主观感觉，它在躯体受到威胁时提供警报信号，是生命不可缺少的一种保护机制。人们通过大量的研究获得了蝎镇痛活性肽，但是获得的镇痛活性肽各有差异，其效果也不完全一致。因此，获得活性更好的蝎镇痛活性肽也是本领域技术人员研究的重点和方向。

发明内容：

本发明所解决的技术问题是提供一系列镇痛活性肽DKK突变体。

本发明还提供了所述镇痛活性肽突变体的衍生物、类似物或活性片段。

本发明还提供了所述的镇痛活性肽DKK突变体、其衍生物、类似物或活性片段的获得方法。

本发明进一步提供了所述的镇痛活性肽DKK突变体、其衍生物、类似物或活性片段的镇痛活性。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明利用生物技术，在镇痛活性肽DKK的基础上筛选获得镇痛活性肽DKK突变体及其衍生物、类似物或活性片段；镇痛活性肽DKK突变体的镇痛生物活性较镇痛活性肽DKK具有显著提高。

本发明所述的镇痛活性肽DKK突变体是在DKK(SEQ ID No.1)的基础上经过DKK的第6、7、8、13、15、23、24、36、37、38、63、64位中的一个或多个位点突变获得。

进一步地，所述的突变体是将镇痛活性肽DKK的第15、23、24、36、37、38位中的一个或多个位点突变为Ala或第13位突变为Arg或第6-8位突变为Arg-Arg-Asp或第63、64位的lys缺失突变。

具体地，本发明所述的突变体是在DKK(SEQ ID No.1)的基础上经过DKK的S13R，KK6364⊿，GSN678RRD，GSN678RRD和KK6364⊿，W36A，T37A，W38A，L15A，K23A，E24A位氨基酸残基分别进行突变获得。其序列分别为SEQ ID No.2-11所示。

本发明还包括镇痛活性肽DKK突变体的衍生物、类似物或活性片段。

本发明提供多种镇痛活性肽DKK突变体及其衍生物、类似物或活性片段的制备方法，它包括：利用基因工程技术进行表达或通过化学合成获得。

所述的基因工程技术方法包括：

⑴将镇痛活性肽DKK突变体及其衍生物、类似物或活性片段的编码DNA重组至表达载体；

⑵用步骤⑴的重组表达载体转化适当的宿主细胞(原核或真核细胞)；

⑶在适合的诱导表达条件下，培养步骤⑵的被转化的宿主细胞；

⑷收获并纯化所得到的表达产物。

在本发明中，宿主细胞包括原核细胞和真核细胞，常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。