[发明专利]一种检测芬普尼的化学发光免疫检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测芬普尼的化学发光免疫检测试剂盒，属于免疫学检测领域。本发明的试剂盒由包被有芬普尼‑载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板、芬普尼标准品、芬普尼‑过氧化物酶标记抗体工作液、发光底物液、浓缩样品稀释液、浓缩洗涤液组成。所述芬普尼‑载体蛋白偶联物是将芬普尼与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，浓缩洗涤液含有0.05%吐温‑20。与传统的酶联免疫吸附分析法比较，本发明的试剂盒具有更高的灵敏度，且检测时间短、费用低，可用于鸡蛋样品中芬普尼的残留量检测。

技术领域

本发明涉及一种检测芬普尼的化学发光免疫检测试剂盒，用于检测动物源性食品中如鸡蛋中的芬普尼含量或残留量。属于免疫学检测领域。

背景技术

芬普尼(Fipronil)，分子式为C₁₂H₄Cl₂F₆N₄OS，是一种农药、杀虫剂，广泛被用于除去跳蚤、头虱类害虫，被世界卫生组织列为中等毒性，杀虫作用主要是神经毒使其死亡。摄入大量的芬普尼对人体可能产生负面影响，除了伤害肝、肾、甲状腺外，还可能出现恶心、呕吐、癫痫等症状。美国环保署也把芬普尼列为C级致癌物，在动物实验中会增加癌症风险，例如甲状腺肿瘤。

一些研究实验证实芬普尼会使动物、环境生态带来危害，也是一种致癌物质，因此目前芬普尼已被许多国禁用，包含意大利、法国、中国大陆，且目前英国、澳洲也考虑禁止使用这种特殊农药。

芬普尼为GABA-氯离子通道抑制剂，与现有杀虫剂无交互抗性，对有机磷、有机氯、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯等类杀虫剂已经产生抗性的或敏感的害虫均有较好的防治效果。适宜的作物有水稻、玉米、棉花、香蕉、甜菜、马铃薯、花生等，推荐剂量下对作物无药害。

今年，继欧洲等地出现芬普尼鸡蛋后，中国台湾农业防检主管部门也确认中国台湾地区鸡蛋验出数据偏高的芬普尼。世界卫生组织(WHO)指，大量进食高浓度芬普尼一段时间，会损害肝脏、甲状腺和肾脏。

化学发光免疫检测技术是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光检测技术的高灵敏性和免疫分析技术的高特异性。本发明通过特有的免疫动物制备具有高亲和力、高特异性的芬普尼抗体，并采用酶标记抗体，建立一种可以检测芬普尼的化学发光免疫试剂盒，将为鸡蛋产品中芬普尼药物留检测提供新方法，对保证畜产品安全提供重要的理论和实践依据，维护畜牧业健康发展具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现的。化学发光免疫分析是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中芬普尼含量越高，反应体系中发光强度越弱；反之，样品中芬普尼含量越少，发光强度越高。

本发明是一种检测芬普尼的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于含有以下成份：

1、包被有芬普尼-载体蛋白偶联物的不透明白色酶标板；所述芬普尼-载体蛋白偶联物是将芬普尼与载体蛋白通过混合酸酐法或碳二亚胺法偶联得到，所述载体蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、鸡蛋白蛋白、鼠血清蛋白或兔血清蛋白；

2、芬普尼标准品；

3、芬普尼-过氧化物酶标记抗体：该成分为用过氧化物酶标记的芬普尼抗体，所述芬普尼抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；

4、发光底物液：该发光底物液是以鲁米诺货异鲁米诺为发光剂的化学发光底物液，分为A液和B液保存，在使用前按1:1混合使用；其中A液位发光增强剂加鲁米诺货发光增强剂加异鲁米诺，B液为过氧化氢溶液或尿素过氧化氢溶液；

5、2倍浓缩稀释液；

6、20倍浓缩洗涤液；