[发明专利]一种可包载量子点的阳离子脂质体流感疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及一种可包载量子点的阳离子脂质体流感疫苗及其制备方法，该阳离子脂质体流感疫苗以阳离子复合物为疫苗佐剂和载体，采用薄膜分散法、冻融法或冷冻干燥法将量子点和流感疫苗原液包载于其中制备，得到的阳离子脂质体流感疫苗的粒径在100nm～3μm之间，zeta电位为30～90mV，包封率为45%～95%，载药量为2%～10%。本发明制备的包载量子点的阳离子脂质体流感疫苗，可作为生物探针，用于细胞摄取成像，且稳定性较好，经小鼠鼻黏膜免疫后，该新型疫苗能显著提高小鼠体液免疫及黏膜免疫应答水平。

技术领域

本发明属于纳米材料技术领域中的一种新型微粒给药系统，特别是涉及一种可包载量子点的阳离子脂质体流感疫苗及其制备方法。

背景技术

疫苗（vaccine）是用于预防传染病的抗原制剂，近年来，随着免疫学技术的不断深入和基因工程技术的迅速发展，DNA重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗不断涌现，与传统疫苗相比，这些新型疫苗纯度高、特异性强，但分子小，免疫原性弱，难以诱导机体产生有效的免疫应答，因此需要佐剂来增强其免疫原性或增强宿主对抗原的保护性应答。

脂质体就是一种对疫苗有很强的增效作用的佐剂。脂质体（Liposomes）由磷脂双分子层构成，结构与细胞膜相似，兼具佐剂和载体功能。自1974年Allison和Gregoriadis首次发现脂质体具有免疫佐剂效应以来，其已成为一种新型的疫苗佐剂，在各个方面被广泛地研究和应用。已有研究证明脂质体无毒、无免疫原性，能保护被包封抗原免遭降解；可将抗原呈递给合适的免疫细胞，而且能诱导树突状细胞(Dendritic cells, DCs)成熟，增强机体的体液和细胞介导的免疫应答，对疫苗有很强的增效作用，因此成为一种理想的疫苗佐剂载体。

作为疫苗佐剂载体的脂质体主要是采用带有电荷的脂质体膜，利用其电荷吸

附特性使脂质体包封抗原的包封率增大，脂质体的稳定性更好。通常来说，脂质体的表观表面电荷主要是由脂质双分子层中的脂质成分决定的，并可通过带电荷的脂质进行修饰，比如，带正电的硬脂酰胺、二甲基双十八烷基铵、溴化三甲基-2, 3-二油酰氧基丙基铵等；带负电荷的磷脂酸、磷酯酰丝氨酸等。据报道，脂质体的表面电荷会影响脂质体在体外的细胞摄取，一般来说，抗原提呈细胞对正电荷脂质体的吞噬作用要强于负电荷和中性脂质体。同时，脂质体的表面电荷对抗体应答也有显著影响。有研究显示，皮下注射OVA脂质体疫苗后，正电荷脂质体与负电荷脂质体或中性脂质体相比，有更高的巨噬细胞摄取，诱导更高的抗体水平。此外，脂质体的表面电荷也会影响其与内源性组织成分的相互作用（比如蛋白质，酶类和细胞），尤其会影响脂质体在注射部位的滞留、引流动力学和在淋巴组织中的定位。研究表明，粒径较大的阳离子脂质体主要是通过增加抗原在给药部位的滞留，促进树突细胞（DCs）成熟，从而增强T细胞免疫应答。

此外，免疫途径也是影响疫苗免疫应答效应的另一重要因素。黏膜是大量致病菌进入人体的区域，其中以流感病毒为典型代表，它主要通过感染呼吸道上皮细胞，经呼吸道黏膜进入人体。获得黏膜免疫应答的最佳方式是在黏膜区域进行抗原免疫。在所有可能的黏膜疫苗接种区域中，鼻黏膜是最具有潜力的区域，它可以改善病人免疫接种，尤其是儿童免疫接种的依从性。单独的抗原以鼻腔免疫的方式通常不能激发保护性的免疫反应，当辅以佐剂或者载体时，通常可以提高现有疫苗的抗原性能。

量子点，又可称为纳米晶体，是一种由II－VI族或III－V族元素组成的纳米颗粒。量子点的粒径一般介于1～10nm之间，由于电子和空穴被量子限域，连续的能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，受激后可以发射荧光。基于量子效应，量子点在太阳能电池，发光器件，光学生物标记等领域具有广泛的应用前景。1997年以来，随着量子点制备技术的不断提高，量子点己越来越可能应用于生物学研究。1998年，Alivisatos和Nie两个研究小组分别在Science上发表有关量子点作为生物探针的论文，首次将量子点作为生物荧光标记，并且应用于活细胞体系，他们解决了如何将量子点溶于水溶液，以及量子点如何通过表面的活性基团与生物大分子偶联的问题，由此掀起了量子点的研究热潮。