[发明专利]一种基于气相色谱-串联质谱的烟叶马来酰肼及其糖苷的定量分析方法

说明书

本发明公开了一种基于气相色谱‑串联质谱的烟叶马来酰肼及其糖苷的定量分析方法，所述的定量分析方法包括以下步骤：1）样品前处理：准确称取烟叶样品粉末，然后进行离心冷冻干燥，取出冻干样品，加入吡啶和MSTFA，涡旋混合，恒温静置硅烷化30 min，得到衍生后的待测样品，转至气相色谱‑串联质谱仪进行分析；2）标准曲线绘制；3）样品分析：将步骤（1）处理后的待测样品进行气相色谱‑串联质谱分析，得到待测样品中马来酰肼及其糖苷的色谱质谱峰面积，输入校准曲线方程，计算得到相对应的物质浓度。本发明通过创造性的检测烟叶中马来酰肼自由态及马来酰肼糖苷结合态的含量，极大的提高了分析结果的准确性，方法简便、效率高。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种基于气相色谱-串联质谱技术的烟叶马来酰肼及其糖苷的定量分析方法。

背景技术

马来酰肼（1，2-二氢-3，6-哒嗪二酮，Maleic Hydrazide，MH)是一种人工合成的植物生长调节剂。马来酰肼通过阻止细胞分裂而抑制烟草侧芽的生长，是国内外烟草行业常用的抑芽剂。马来酰肼作为常见农药在烟草种植上大量使用，其在烟叶中的残留也一直备受关注。国际烟草科学研究合作中心（CORESTA）2013年颁布的烤后烟叶马来酰肼的指导残留水平（GRL）为80 mg/kg。因此建立一种简单、快速分析烟叶中马来酰肼残留物的方法对于保障烟叶安全、杜绝马来酰肼抑芽剂的滥用具有重要意义。

马来酰肼在烟叶中主要以自由态及糖苷结合态存在。其中糖苷结合态马来酰肼包括马来酰肼-O-β-D-葡萄糖苷和马来酰肼-N-β-D-葡萄糖苷。文献报道的烟叶中马来酰肼测定方法包括分光光度法、液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、液相色谱质谱法等。这些方法包含只测自由态马来酰肼和将马来酰肼糖苷水解后测定其总量两种类型。其中只测自由态马来酰肼无法反映马来酰肼的真实残留量，而将马来酰肼糖苷水解后测定其总量的方法由于无法对两种糖苷物质是否彻底水解进行评价，其测定准确性也值得商榷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于气相色谱-串联质谱的烟叶马来酰肼及其糖苷的定量分析方法。

本发明的目的是这样实现的，包括以下步骤：

1）样品前处理：准确称取烟叶样品粉末，当所述的烟叶样品粉末为新鲜烟叶样品粉末时，称取量为100 mg；当所述的烟叶样品粉末为烤后烟叶样品粉末时，称取量为10 mg；然后进行离心冷冻干燥0.5~1.5 h，取出冻干样品，加入200±100 μL 吡啶和80±40μLMSTFA，涡旋混合30 s，37℃恒温静置硅烷化30 min，得到衍生后的待测样品，转至气相色谱-串联质谱仪进行分析；

2）标准曲线绘制：以甲醇为溶剂，配置10μg/mL 的马来酰肼及其糖苷的混合标准溶液，然后分别移取5、10、20、40、60、80、100、200、300 μL 标准混合溶液至离心管，再分别称取不含马来酰肼及其糖苷的烟叶样品粉末至离心管作为样品基质，当所述的烟叶样品粉末为烤后烟叶样品粉末时，称取量为10 mg；当所述的烟叶样品粉末为新鲜烟叶样品粉末时，称取量为100mg；制成不同浓度梯度的待测样本，然后将待测样本分别进行步骤（1）中所述的离心冷冻干燥和萃取衍生处理，再转至气相色谱-串联质谱进行分析，得到每个浓度梯度样本对应的色谱质谱峰面积，将得到的峰面积和其对应的浓度梯度进行线性拟合，得到校准曲线方程和线性相关系数；

3）样品分析：将步骤（1）处理后的待测样品进行气相色谱-串联质谱分析，得到待测样品中马来酰肼及其糖苷的色谱质谱峰面积，输入校准曲线方程，计算得到相对应的物质浓度。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

1、本发明建立了一种基于气相色谱-串联质谱的烟叶中马来酰肼及其糖苷的分析方法，通过创造性的检测烟叶中马来酰肼自由态及马来酰肼糖苷结合态的含量，极大的提高了分析结果的准确性，有效避免了现有技术中仅测自由态马来酰肼或者将马来酰肼糖苷水解后测定总量带来的不确定性，而且本发明的分析方法简便、效率高。