[发明专利]一种基因重组蜘蛛丝蛋白牙齿嵌体及其制备方法

说明书

本发明提供一种基因重组蜘蛛丝蛋白牙齿嵌体及其制备方法，包括基因重组蜘蛛丝蛋白溶液的制备、基因重组蜘蛛丝蛋白溶液冷冻干燥、基因重组蜘蛛丝蛋白溶解于六氟异丙醇或者水中、基因重组蜘蛛丝蛋白棒材制备、切削加工。通过控制基因重组蜘蛛丝蛋白溶液制备参数、干燥固化等参数以及掺杂固相增强颗粒，可以控制基因重组蜘蛛丝蛋白牙齿嵌体的力学性能，获得与人体骨骼力学参数、牙齿咬合匹配的优良性能牙齿嵌体，并且本发明获得的牙齿嵌体与人体兼容，不会产生炎症问题。

技术领域

本发明涉及生物医药材料技术领域，特别是涉及一种基因重组蜘蛛丝蛋白牙齿嵌体及其制备方法。

背景技术

牙齿嵌体是一种嵌入牙体内部，用以恢复牙体缺损的形态和功能的修复体。根据制作嵌体材料不同，可分为合金嵌体、树脂嵌体和瓷嵌体。合金嵌体由金属合金制备而成，有良好的延展性能和机械性能，是制作后牙嵌体理想的修复材料；树脂嵌体由复合树脂加工而成，其成分和聚合方式比常规充填的树脂更卓越，材料对牙磨耗小，易修补，是一种良好的美学嵌体材料；瓷嵌体则主要有三种加工方式：有直接在耐火材代型上制作的烤瓷嵌体，有CAD/CAM磨削出的瓷嵌体，有在模型上作蜡型包埋后铸造出的铸瓷嵌体，它们具有卓越的美观性能。这三种当前主流的牙齿嵌体材料有一个共同的缺点，那就是与人体不兼容，容易与人体产生排斥反应，产生炎症。

蜘蛛丝蛋白是一种特殊的纤维蛋白，它不仅具有很高的强度、弹性、柔韧性、伸长度和抗张强度，而且还具备轻盈、生物兼容、生物可降解等优点，但其产量太低。基于基因工程技术，通过工程菌表达系统，可得到与天然蜘蛛丝蛋白性质相近的基因重组蜘蛛丝蛋白。其本身具有良好的机械性能和理化性质，并且与人体有极好的生物相容性，在人体降解之后是氨基酸和多肽，对人体无毒害作用，所以基因重组蜘蛛丝蛋白被广泛应用于生物医学研究领域。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种基因重组蜘蛛丝蛋白牙齿嵌体及其制备方法，用于解决现有技术中牙齿嵌体与人体不兼容，容易与人体产生排斥反应，产生炎症的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种基因重组蜘蛛丝蛋白牙齿嵌体的制备方法，所述制备方法至少包括：

1)将经过发酵并表达基因重组蜘蛛丝蛋白的工程菌溶解在一定浓度的缓冲溶液中，然后破碎所述工程菌，并进行离心，收集第一上层清液；

2)对所述第一上层清液进行保温，并继续进行离心，收集第二上层清液；

3)在所述第二上层清液中加入镍层析柱，利用第一清洗溶液洗去吸附在所述镍层析柱上的杂蛋白，再利用第二清洗溶液洗脱吸附在所述镍层析柱上的目标基因重组蜘蛛丝蛋白，并收集目标基因重组蜘蛛丝蛋白溶液；

4)将收集的所述目标基因重组蜘蛛丝蛋白溶液装入透析袋中进行透析，之后离心，收集第三上层清液，以获得所需的基因重组蜘蛛丝蛋白溶液；

5)利用冷冻干燥工艺，将步骤4)获得的所述基因重组蜘蛛丝蛋白溶液转变为无水基因重组蜘蛛丝蛋白；

6)将所述无水基因重组蜘蛛丝蛋白溶解于六氟异丙醇或者水中，获得基因重组蜘蛛丝蛋白的六氟异丙醇溶液或水溶液；

7)将所述基因重组蜘蛛丝蛋白的六氟异丙醇溶液或者水溶液注入特定的模具中，并依次

通过甲醇处理和风干工艺制成基因重组蜘蛛丝蛋白棒材，再将所述基因重组蜘蛛丝蛋白棒材切削加工成所需的牙齿嵌体。

优选地，所述步骤1)中的缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷-盐酸/氯化钠/咪唑溶液，其中，三羟甲基氨基甲烷-盐酸的PH值为8，浓度为0.1～100mmol/L，氯化钠的浓度为0.1～1000mmol/L，咪唑的浓度为0.1～1000mmol/L。