[发明专利]一种凡纳滨对虾纤维蛋白原LvFREP及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了一种凡纳滨对虾纤维蛋白原LvFREP及其编码基因和应用。所述的凡纳滨对虾纤维蛋白原基因LvfreP的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，其编码蛋白LvFREP的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明首次从凡纳滨对虾中克隆出纤维蛋白原基因LvfreP，通过实验证明该基因表达产物LvFREP在体外对多种细菌具有强烈凝集作用，在虾体内可快速帮助虾体清除细菌。因此，本发明所提供的凡纳滨对虾纤维蛋白原基因LvfreP和纤维蛋白原LvFREP为筛选具有优良性状的凡纳滨对虾家系提供了遗传标记，也为凡纳滨对虾遗传改良提供了新的靶位点。

技术领域：

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种凡纳滨对虾纤维蛋白原LvFREP及其编码基因和应用。

背景技术：

纤维蛋白原(Fibrinogen)在人体中是一种具有凝血功能的蛋白质，是纤维蛋白的前体。除了参与凝血、止血外，还发挥多种功能，它可与多种细胞结合、参与人类癌症反应，并在细胞粘附以及炎症反应中起重要作用。目前，纤维蛋白原被报道广泛存在于脊椎和无脊椎动物的组织中。在无脊椎动物中，由于缺乏获得性免疫，其主要依赖体液中各免疫因子的共同作用抵御外来病原菌侵染。模式识别受体(Pattern recognition receptors，PRRs)是激活非特异性免疫的重要免疫因子。目前在无脊椎动物中已发现多种PRRs，其中最主要的PRRs是可识别微生物表面的凝集素；这些凝集素参与起始免疫反应。据报道，纤维蛋白原作为凝集素在多种无脊椎动物的免疫反应过程中发挥重要作用。

纤维蛋白原相关蛋白(Fibrinogen-related proteins，FREPs)是具有保守纤维蛋白原结构域(Fibrinogen-like domain,FReD)的一类蛋白。FReD主要由大约200个氨基酸残基组成，并含有24个保守氨基酸残基。FREPs作为PRRs参与无脊椎动物的免疫反应已在多种无脊椎动物中得到报道，包括紫怡贝(Mytilus galloprovincialis)、海兔(Aplysiacalifornica)、长牡蛎(Crassotrea gigas)、热带按蚊(Neotropical anopheline)等，但在虾类中报道极少。目前我们已经在凡纳滨对虾中发现10个FREPs转录本，但其功能有待进一步验证。

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)又称南美白对虾，属暖水性经济虾类。由于其具有盐度温度适应范围广、耐干性强、肉质鲜美、个体较大等优点，在世界各地被广泛养殖，凡纳滨对虾养殖产业已成为我国水产养殖的支柱性产业。然而，近年来由于对虾传染病频繁大规模爆发，给对虾养殖产业造成巨大损失的同时，也威胁着产业的健康和可持续发展；且抗生素等药物的广泛使用造成药物残留，环境污染，并产生抗药性菌株等负面影响。因此提高对虾机体的抗病力、选育具有抗病和抗逆性状的对虾品种，一直是对虾种业和养殖业发展的追求目标，已成为近十年来对虾种业发展的关键。其中，探索阐述虾类免疫防御机制是非常重要的基础工作，探查免疫功能基因及其功能也可以加快从遗传工程或遗传选育途径进行的育种工作。纤维蛋白原相关蛋白作为模式识别受体，可能在对虾非特异免疫反应中发挥重要作用。研究凝血纤维相关蛋白在凡纳滨对虾中的免疫调控机制，可为选育具有抗病和抗逆性状的对虾品种提供遗传标记，同时也可为对虾遗传改良提供新的靶位点。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种凡纳滨对虾纤维蛋白原LvFREP及其编码基因和应用。

本发明的第一个目的是提供一种凡纳滨对虾纤维蛋白原LvFREP，其氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示。

本发明的第二个目的是提供一种编码上述的凡纳滨对虾纤维蛋白原LvFREP的凡纳滨对虾纤维蛋白原基因LvfreP。考虑到密码子的简并性，在不改变氨基酸序列的前提下，对上述凡纳滨对虾纤维蛋白原基因LvfreP的核苷酸序列进行修改，也属于本发明的保护范围内。

优选，所述的凡纳滨对虾纤维蛋白原基因LvfreP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。