[发明专利]一种经过空间诱变的紫花苜蓿组培苗的培育方法

权利要求书

1.一种经过空间诱变的紫花苜蓿组培苗的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)地面培养：

将经过空间诱变后返回地面的紫花苜蓿组培苗放置于光照培养箱中，于黑暗中适应2d，转为暗光培养2d后，调整光照为正常光照的2/3，培养2d，之后转为正常光照，继续培养；

2)炼苗：

在光照培养箱内继续培养10d后，开始炼苗，将培养瓶打开1/4口，炼苗3d，适应之后将瓶口打开1/2，继续炼苗2d，最后瓶口完全打开，炼苗2d，准备移栽；

3)移栽：

将紫花苜蓿组培苗从培养基中移出，根部用无菌水缓缓冲洗干净，移入填充混合基质的塑料花盆中，混合基质用蒸馏水浸湿，置于光照培养箱内培养，第一周浇灌蒸馏水，每盆浇灌100mL蒸馏水，之后每3d浇灌100mL的1/2Hogland营养液；

4)扦插：

空间诱变紫花苜蓿组培苗移栽后继续生长50d，剪取生长旺盛、幼嫩、带有芽点的高度为10cm的枝条，取斜截面，将其在0.01mM IAA溶液中浸泡5min，插入装有混合基质的花盆中，花盆直径为20cm，高10cm，3株/盆，扦插后的第一周浇灌蒸馏水，之后每3d浇灌一次1/2Hogland营养液；

5)大田管理：

紫花苜蓿扦插苗在室内继续生长2-3个月，将母株和扦插株的地上部进行平茬处理，转移至大田，常规管理，收获当代种子。

2.根据权利要求1所述的一种经过空间诱变的紫花苜蓿组培苗的培育方法，其特征在于，进行空间诱变前的组织培养实生苗的获得方法为：挑选色泽金黄、颗粒饱满的紫花苜蓿种子，在超净工作台内用2％的NaClO溶液浸泡消毒10min，用无菌水冲洗3-5次，再用75％酒精浸泡30s，用无菌水冲洗5-7次后，浸泡在无菌水中过夜，之后播种于装有15mL MS固体培养基的50mL离心管内，2粒/管，暗催芽3d后，置于光照培养箱内培养1周，即可得到空间诱变前的组织培养实生苗。

3.根据权利要求2所述的一种经过空间诱变的紫花苜蓿组培苗的培育方法，其特征在于，所述MS固体培养基的制备方法为：MS+30g/L蔗糖+7g/L植物凝胶；其中MS的的制备方法为：加入1900mg/L KNO₃、170mg/L KH₂PO₄、1650mg/L NH₄NO₃、370mg/L MgSO₄·7H₂O、440mg/L CaCl₂·2H₂O、6.2mg/L H₃BO₃、0.83mg/L KI、22.3mg/L MnSO₄、8.6mg/L ZnSO₄·7H₂O、0.025mg/L CuSO₄·7H₂O、0.25mg/L NaMoO₄·2H₂O、0.025mg/L CoCl₂·6H₂O、37.3mg/L Na₂·EDTA·2H₂O、FeSO₄·7H₂O、2mg/L甘氨酸、0.5mg/L烟酸、0.1mg/L盐酸硫胺素B1、0.5mg/L盐酸吡哆醇B6、100mg/L肌醇，pH值调为5.7-5.9。

4.根据权利要求2所述的一种经过空间诱变的紫花苜蓿组培苗的培育方法，其特征在于，所述光照培养箱内的温度为22-26℃，光照强度为600μmol·m^-2·s^-1，光照时间为16h/d，相对湿度为55-65％。

5.根据权利要求1所述的一种经过空间诱变的紫花苜蓿组培苗的培育方法，其特征在于，所述步骤1)中，暗光的光照强度为200μmol·m^-2·s^-1，正常光照强度为600μmol·m^-2·s^-1，调整光照的光照强度为400μmol·m^-2·s^-1。